雌激素和双酚a快速影响发育中大鼠海马nmda受体活性及其机制动物学生理学专业论文.docxVIP

摹▲ 摹 ▲ J RAPID EFFECTS oF ESTRoGEN AND BISPHENOL—A ON Ⅳ-METHYL_．D．ASPARTATE RECEPTOR ACTIVITY AND THEIR MECHANISoM IN DEVELoPMENT RAT HIPPoCAMPUS A Dissertation in Zoology Under the Supervision of Professor Xu Xiaohong By Luo Qingqing Zhej iang Normal University Jinhua，Zhej i ang，China April，2010 fMF iJ 11 A 4 . 雌激素和双酚A快速影响发育中大鼠海马NMDA受体活性及其机制摘要 雌激素和双酚A快速影响发育中大鼠海马NMDA受体活性及其机制 摘要 雌激素及各种类雌激素对脑发育及中枢神经系统的影响己引起人们的广泛重视。发 育中的脑是对雌激素敏感的重要靶器官，雌激素可通过神经发生和脑源性神经营养因 子、神经元突触可塑性和海马神经回路等影响学习记忆和认知功能，对大脑产生广泛影 响。双酚A(bisphen01．A，BPA)作为一种常见的内分泌干扰物，可模拟雌激素作用对 发育中的大脑产生影响。本实验室前期研究表明，围生期BPA暴露可引起雌雄小鼠发 育期和成年期的多种神经行为改变，同时增强发育期仔鼠芳香化酶P450蛋白的表达， 抑制雌激素受体B(Estrogen receptor beta，ERl3)和N．甲基．D．天冬氨酸 (N．methy．D．aspratate，NMDA)受体各亚基的表达。考虑到雌激素对脑的影响除了经 典的基因调节机制外，还有快速核外机制的参与，本研究探讨了雌激素和BPA对发育 期大鼠海马NMDA受体活性的快速作用，并对其可能机制进行了初步分析。 方法：选取出生18天的清洁级Sprague．Dawley大鼠(与母鼠合笼饲养)，苯甲酸雌 二醇(estradiol benzoate，EB，80 p,g／kg)经颈部皮下注射(subcutaneous injection，SC．)， 注射体积控制在O．05 ml左右，对照组注射等体积花生油。BPA实行腹腔注射(500 gg／kg 或者50 gg／kg)给药，注射体积控制在0．2 IIll左右，对照组注射等体积生理盐水。皮下 注射和／或者腹腔注射1 5 min左右，经脑立体定位海马给予雌激素受体拮抗剂ICI 1 82， 780或MEKl／2阻断剂U0126；对照组海马内注射等量人工脑脊液。EB或者BPA给药 1 h后将动物断头处死，分离双侧海马组织，液氮冷冻保存后存于．80℃超低温冰箱内直 至使用。采用Western blot方法，用NRl，NR2B，ERl3，磷酸化NR2B，ERK，磷酸化 ERK等兔来源多克隆抗体来检测相应的蛋白表达。 结果：1．外周给予EB或BPA后1 h，出生1 8 d雄性大鼠海马NMDA受体亚基NRl 和NR2B蛋白表达和ERB蛋白表达没有变化；然而，NMDA受体亚基NR2B磷酸化的 表达显著增加(尸0。01)。EB或BPA对发育期雌性大鼠NMDA受体亚基NRl、NR2B、 磷酸化NR2B和ERl3蛋白的表达也有类似的作用。这一结果提示急性给予EB或BPA 并不影响NMDA受体NRl和NR2B亚基和ERB蛋白表达，但可快速促进NR2B亚基 的磷酸化；且这一作用没有性别差异。 2．为了分析EB和BPA快速促进NR2B亚基磷酸化是否通过膜相关的雌激素受体 2．为了分析EB和BPA快速促进NR2B亚基磷酸化是否通过膜相关的雌激素受体 进行，在外周给予EB或BPA 15 min后，海马内注射雌激素受体拮抗剂ICI 182，780以 阻断雌激素受体(estrogen receptor，ER)的活性。结果显示用ICI 182，780预处理可显 著抑制由EB或BPA诱导的NR2B亚基磷酸化水平增加(火0．01)，表明EB或BPA诱 导的快速NR2B亚基磷酸化是通过膜相关的雌激素受体介导，因为基因调节机制需要更 长的时间。 3．外周给予EB或BPA 1 h，并不影响出生18天雄性大鼠海马ERKl／2蛋白表达， 但能显著提高ERKl／2的磷酸化水平(P，0．01)，表明EB和BPA都可快速激活ERKl／2 信号转导通路。进一步用雌激素受体拮抗剂ICI 182，780预处理，可明显抑制EB或BPA 诱导的ERKl／2磷酸化(尸O．01)，表明EB或BPA可能通过膜雌激素受体诱导EIⅨ1／2 蛋白磷酸化。 4．为了进一步分析EB或BPA快速诱导NMDA受体NR2B亚基的磷酸化的信号途 径，在外周给予EB或BPA 15