二氮嗪预处理h2o2损伤l6骨骼肌成肌细胞的作用人体解剖与组织胚胎学专业论文.docxVIP

i㈣!fff!flflfffllfffII|删㈣㈣中文摘要 i㈣!fff!flflfffllfffII|删㈣㈣ 中文摘要 Y1 900583 二氮嗪预处理对H202损伤L6骨骼肌成肌细胞的作用 摘 要 目的：缺血性心脏病是严重危害人类健康的疾病之一，目前的治疗包 括药物治疗、介入、外科手术等治疗，虽然在一定程度上延缓了病程的 发展，但却不能逆转己坏死的心肌，无法中断心衰的进展。细胞移植为病 损心脏的细胞重建及衰竭心脏的功能恢复，提供了一种崭新的方法。研究 结果表明干细胞移植能促进心脏血管和心肌细胞的新生，改善心肌血液供 应，增强心脏功能。在细胞移植的众多研究中，骨骼肌成肌细胞移植因有 更广泛的临床应用前景更是受到科学家的青睐。骨骼肌成肌细胞存在于骨 骼肌肌膜和基膜之间，是骨骼肌细胞的前体细胞。骨骼肌成肌细胞作为供 体细胞有很多理想的特性，如在体外未分化状态有增殖能力，在缺血组织 内仍然能够成活，用自体成肌细胞移植，无免疫排斥反应，可作为基因的 载体等。这些优点使骨骼肌成肌细胞成为心脏干细胞移植主要的干细胞种 类之一。但是移植后干细胞在宿主心肌受损的微环境中存活率极低，严重 影响细胞治疗的效果。急性心梗后氧化酶与抗氧化酶的平衡被打破，活性 氧化物(reactive oxygen species，ROS)在心梗区和非心梗区均升高，氧 化应激持续存在。梗死心脏中增高的活性氧化物是诱导移植细胞凋亡的重 要因素。减少缺血应激时的细胞凋亡，提高移植细胞存活率，增强细胞移 植的治疗效果是目前急需解决的问题。本研究采用过氧化氢(H202)体外诱 导L6骨骼肌成肌细胞(L6 Skeletal Myoblast，L6Sl蝴)损伤，建立L6S10订 氧化应激损伤模型，观察二氮嗪(diazoxide，Dz)预处理对氧化应激损 伤L6Sl洲的作用，意图寻找提高移植细胞存活率、增强治疗效果的有效 方法。 方法： l不同浓度H202对L6SIm的作用 体外培养L6骨骼肌成肌细胞(L6 Skeletal Myoblast，L6Sld订)，用H202诱导L6SkM损伤。实验分正常对照 组(nonnal contr01)，H202损伤1—5组(H202 group，浓度分别为O．10、O．50、 1．oo、1．20、1．50mmol／L，作用时间为12小时、24小时、36小时)。通过 MTT比色法检测各组细胞活力，摸索诱导H202氧化损伤的适当浓度及时 中文摘要间，建立L6Sl洲H202氧化应激损伤模型。 中文摘要 间，建立L6Sl洲H202氧化应激损伤模型。 2不同浓度DZ预处理对L6SI湖的作用 体外培养L6骨骼肌成肌细胞 (L6Sl湖)，实验分正常对照组(nomal contr01)，H202损伤组(H202 group，1．oommol／L，24hours)，DZ预处理1．4组(DZ group)：在培养基 中先加入终浓度为50umol／L、100umol／L、200umol／L、400umol／L的二氮 嗪孵育30分钟，再换为含1．oommol／LH202的培养基作用24小时诱导损 伤。通过MTT比色法检测各组细胞活力，观察不同浓度二氮嗪预处理对 过氧化氢损伤后细胞活力的影响，摸索DZ的适当浓度，建立DZ预处理 L6Sl洲的保护实验模型。 3 Dz预处理对H202损伤L6SI湖的作用体外培养L6骨骼肌成肌细胞 (L6Sl洲)。实验分正常对照组(no肌al contml)，H202损伤组(H202 group， 1．oommol／L，24hourS)，DZ预处理组(DZ group，200umol／L，30min+H202 损伤)。MTT比色法检测各组细胞活性；检测各组培养液中乳酸脱氢酶 (LDH)含量并计算LDH的释放率，评估细胞膜损伤情况；光镜、电镜观察 细胞的形态学变化；流式细胞术测定细胞凋亡率、细胞周期；免疫细胞化 学染色检测C外C、PCNA、Bcl．2、Bax的表达；weStem．blot法检测Bcl．2、 Bax的表达水平。 结果： l不同浓度H202对L6SIm的作用MTT检测结果提示，随着H202浓度 的升高，作用时间的延长，细胞活力(OD值)逐渐降低，呈明显的剂量 和时间依赖性。我们选择引起细胞活力下降45％左右的H202浓度 (1．oommol／L)作用24h，建立L6Sl(M损伤模型。 2不同浓度Dz预处理对L6Slm的作用M1vr检测结果提示，经DZ预 处理后，细胞活力(0D值)呈上升趋势。与H202组相比较，DZ looumol／L、 200啪ol／L、400 umol／L浓度组细胞吸光度值(OD值)显著上升。200umol／L 与400 umol／L浓度组之间吸光度值无统计学差异，我们选择200umol