表达鹅细小病毒vp3基因重组禽痘病毒的构建及其产物反应原性分析预防兽医学专业论文.docxVIP

学位论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文系本人在导师指导下独立完成的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标记和致谢的部分外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得任何教育机构的学位或学历而 使用过的材料。与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了 明确的说明并表示谢意。 本人如违反上述声明，愿意承担由此引发的一切责任和后果。 研究生签名： 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下所完成的学位论文，学校有权保存其电子和纸制文档，可 以借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容，可以向有关部门或机构送交并 授权其保存、借阅或上网公布本学位论文的全部或部分内容。对于保密论文，按 保密的有关规定和程序处理。 本学位论文属于： 1．保密 口，在 年解密后适用于本声明；2．不保密 幺 研究生签名： 万方数据 硕士学位论文 硕士学位论文 表达鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒的构建及其产物反应原性分析 摘 要 鹅细小病毒病(goose parvovimsis，GP)是由鹅细小病毒(goose parvovims， GPV)感染而引起雏鹅或雏番鸭的一种高接触性急性传染病。GPV基因组编码 的结构蛋白主要有VPl、VP2和VP3，VP3作为主要的结构蛋白，约占总蛋白 的80％，为病毒衣壳的主要成分，可以刺激机体产生中和抗体，使其成为研制基 因工程疫苗的首选基因。改造的禽痘病毒在基因表达、活载体疫苗开发和治疗疾 病方面发挥着重要作用，它缺失了禽痘病毒的致病基因，但仍然具有复制活性， 使其安全性高，而使其成为应用最广泛的活载体疫苗研制的表达载体。 目前，国内外对GP防制一般多采取传统疫苗免疫成年母鹅的方式，使雏鹅 从母源抗体中获得免疫保护，也有直接免疫雏鹅使其获得免疫保护。但是，弱毒 疫苗和灭活疫苗等传统疫苗存在着毒力返强、灭活不彻底、散毒、不能区分免疫 与自然感染等缺陷和不足，急需研制一种安全、有效的新型疫苗。截止目前，国 内外对GPV保护性抗原基因的禽痘病毒活载体疫苗研究仍处于起步阶段，在 GPV重组禽痘病毒载体疫苗方面存在较大的研究空间。 本研究以前期构建的含YBLJ株GPV．VP3基因的pMDl8T-GPV-VP3质粒为 模版，经带Barn H I酶切位点的引物进行PCR，扩增到GPV．VP3基因并进行 TA克隆，通过Barn H I酶切位点将GPV．VP3基因连入pSY538载体启动子下 游，构建pSY538．VP3质粒；经ClonExpress II One Step Cloning Kit将报告基 因Lac Z克隆到pSY538．VP3质粒的Sma I酶切位点，构建pSY538．VP3-Lac Z 质粒；用Not I将其单酶切，将VP3表达盒和Lac Z表达盒定向插入到转移载体 pSY681，构建表达GPV—VP3基因的重组禽痘病毒转移载体pSY681．GPV．VP3。 经酶切与测序鉴定，将基因序列和连接方向正确的质粒pSY681一GPV—VP3转染 事先感染S．FPV．017株亲本FPV的鸡胚成纤维细胞(CEF)，通过同源臂交换， 用蚀斑法筛选并纯化，经10轮筛选得到纯化的能表达GPV．VP3基因的重组禽 痘病毒rFPV．GPV．VP3，经PCR方法检测重组禽痘病毒rFPV．GPV．VP3中VP3 基因的存在情况，通过间接免疫荧光和Western．blot检测表达产物的反应原性。 本研究为进一步开展GPV—VP3基因重组禽痘病毒载体疫苗的体内免疫试验 研究，以及探讨GPV．VP3基因重组禽痘病毒载体疫苗的免疫保护力和免疫保护 机制奠定基础。 关键词：鹅细小病毒；VP3基因；重组禽痘病毒；反应原性 万方数据 硕士学位论文表达鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒的构建及其产物反应原性分析Abstract 硕士学位论文表达鹅细小病毒VP3基因重组禽痘病毒的构建及其产物反应原性分析 Abstract Goose Parvovirus(Goose Parvovirusis，GP)was gave rise to goose parvovirus (Goose Parvovirus，GPV)goslings caused acute，subacute and contacted frequently infectious diseases．GPV genome contained three structural proteins(VP 1，VP2 and VP3)．However，the VP3 protein was main component of the viral capsid，about