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豆科植物根瘤根细菌的形态观察及其分离
实验二 豆科植物根瘤、根瘤细菌的形态观察及其分离 一、目的要求 1、观察豆科植物的根瘤和根瘤细菌的形态。 2、掌握从根瘤中分离根瘤细菌的方法及培养的方法 二、实验材料 1、豆科植物新鲜标本数株。 2、加入结晶紫的根瘤菌培养基（10mL）。 3、无菌培养皿、接种环、无菌水、手术剪、无菌玻棒、载玻片、镊子、酒精灯、显微镜、香柏油、擦镜纸。 4、75%酒精、0.1%升汞液。 5、革兰氏染色液一套。 三、试验步骤 （一）根瘤细菌的分离。 （二）根瘤中类菌体的观察。 （一）根瘤细菌的分离 1、取已融化的根瘤菌培养基以无菌操作制成平板。 2、用清水洗净泥土，用剪刀剪下呈粉红色的根瘤1-2个，剪时稍带一段根，以免损伤根瘤。 3、将根瘤浸泡在75%酒精的无菌培养皿中，5min后，用镊子将根瘤转入盛有0.1%升汞（HgCl2）溶液的无菌培养皿中浸泡5min，用无菌水洗3次，用无菌镊子将根瘤至于平板琼脂上，按下列方法划线。 （1）将根瘤夹破，用破开那一面划线3条。 （2）将接种环灭菌，从（1）划线3条。 （3）将接种环灭菌，从（2）划线3条。 （4）将接种环灭菌，从（3）划线3条。 5、观察菌落形态，选取典型菌落进行涂片，革兰氏染色，油镜下观察并绘图。 （二）根瘤中类菌体的观察 用无菌镊子取消毒过的根瘤1个，放在洁净的载玻片上压碎，加蒸馏水1滴，用接种环混合均匀，涂片，革兰氏染色法染色，油镜下观察并绘图。 * * 4、倒置28~300C培养2-4天，观察结果。 *
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