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牛磺胆酸对小鼠胸腺细胞凋亡影响的研究 　　摘要：为研究牛磺胆酸对体外培养小鼠胸腺细胞凋亡的影响，探讨其免疫调节作用，采用梯度离心法分离获取小鼠胸腺细胞，37 ℃培养12 h后与不同浓度TCA共孵12 h。以流式细胞术对原代培养胸腺细胞早期凋亡进行定量检测；应用分光光度法检测了凋亡特异性蛋白酶Caspase-9、Caspase-3活性的变化。结果表明，TCA3组与胸腺细胞共孵12 h后，可极显著抑制磷脂酰丝氨酸外翻，抑制细胞凋亡，TCA2组可显著提高Caspase-9、Caspase-3活性，诱导细胞凋亡。说明TCA通过对体外培养小鼠胸腺细胞凋亡的调节作用来调节机体免疫功能。　　关键词：牛磺胆酸；细胞凋亡；免疫调节　　中图分类号：R965 文献标识码：A 文章编号：0439--3706-02　　DOI：/　　Abstract： In this paper the study was aimed at discussing the immunoregulation of taurocholic acid by analyzing its effects on mice thymocyte apoptosis. The mice thymocyte cells were isolated by gradient centrifugation and cultured under 37 ℃ with TCA of different concentration for 12 hours. Through flow cytometry，the thymocyte apoptosis in early stage were detected quantitatively. Besides，the activity of caspase-9 and caspase-3 were detected through spectrophotometric methods. The results showed that the TCA group 3 could dramatically restrain phosphatidylserine from eversion and restrain the cells apoptosis. Meanwhile，TCA group 2 could greatly improve the activity of caspase-9 and caspase-3，and induce the cells apoptosis. It indicated that TCA adjusts organism immune function by regulating the mice thymocyte apoptosis.　　Key words： taurocholic acid ； mice thymocyte apoptosis； immune regulation　　胆汁在中国医药上的应用历史悠久[1]。大量的药理实验表明，动物胆汁的主要药理作用是由胆酸盐和胆汁酸发挥的。牛磺胆酸是牛羊胆汁中的主要有效成分之一。研究表明TCA具有镇咳、祛痰、平喘、抗炎作用，对心脏和血压也具有一定的影响[2-4]。据报道[5]，TCA对机体免疫细胞功能具有调节作用。免疫细胞的凋亡在免疫系统的自稳中极为重要，已成为当今免疫学研究的一个热点。本试验采用流式细胞等技术，研究不同浓度TCA对原代培养小鼠胸腺细胞凋亡的影响，探讨TCA对机体免疫功能的调节作用，从而为TCA的临床应用奠定基础。　　1 材料与方法　　 材料　　 试验动物 清洁级纯种昆明小白鼠，体重 g，雌雄各半，由内蒙古大学实验动物研究中心提供。　　 药品与试剂 牛磺胆酸，实验室自制，纯度达97%以上；淋巴细胞分离液，天津灏洋生物制品科技有限责任公司，批号LTS1077； Caspase-3分光光度法检测试剂盒，南京凯基生物科技发展有限公司，货号KGA-203；Caspase-9分光光度法检测试剂盒，南京凯基生物科技发展有限公司，货号KGA-403；Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒，南京凯基生物科技发展有限公司，货号KGA-102。　　 主要仪器 酶标仪；超净工作台；流式细胞仪；CO2培养箱。　　 ?稻荽?理 试验结果采用x±s表示，用SAS 软件处理数据，两样本比较采用t检验，样本组间差异比较采用F检验。　　 方法　　 胸腺细胞的获取 眼球放血处死后，75%乙醇浸泡2 min，无菌分离胸腺，去除小血管及结缔组织，置于4 ℃培养液中，在250目筛网轻轻研磨，离心，洗涤2次，重悬细胞于含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液中