荧光光谱的原理与运用.pptVIP

荧光法的应用 1.荧光激发光谱和发射光谱 （1）荧光发射光谱：固定激发光的波长，测量不同荧光波长处荧光的强度，得到荧光光谱，即荧光强度—荧光波长图。 （2）荧光激发光谱（吸收光谱）：在荧光最强的波长处测量随激发光波长的改变而变化的荧光强度，得到荧光激发光谱。即荧光强度-激发光波长图。 a.Stokes位移 激发光谱与发射光谱之间的波长差值。荧光的波长总是大于激发光的波长，这是由于振动弛豫和内转换过程损失了一定的能量。 b.发射光谱的形状与激发波长无关 电子跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量，产生不同吸收带，但均回到第一激发单重态的最低振动能级再跃迁回到基态，产生波长一定的荧光。 c.镜像规则 通常荧光发射光谱与它的吸收光谱（与激发光谱形状一样）成镜像对称关系。 激发光谱与发射光谱的关系 2.定量分析方法 定量方法：①标准曲线法： 配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。 ②比较法： 在线性范围内，测定标样和试样的荧光强度，再进行比较。 定量依据：低浓度时，溶液荧光强度与荧光物质浓度成正比 F = KC 3.无机物的荧光分析 无机物能够直接产生荧光并用于测定的很少。可通过与荧光试剂作用生成荧光配合物、或通过催化或猝灭荧光反应进行荧光分析。非过渡金属离子的荧光配合物较多。可用于荧光分析的元素已近70种。 荧光试剂是具有两个或以上与MZ+形成螯合物的电子给予体官能团的芳香结构。 OH N SO3Na N=N OH HO ON 8-羟基喹啉 石榴茜素R 无机化合物的分析： 铍、铝、硼、镓、硒、镁、稀土常采用荧光分析法； 氟、硫、铁、银、钴、镍采用荧光熄灭法测定； 铜、铍、铁、钴、锇及过氧化氢采用催化荧光法测定； 铬、铌、铀、碲采用低温荧光法测定； 铈、铕、锑、钒、铀采用固体荧光法测定。 4.有机物的荧光分析 荧光法在有机化合物中应用较广。芳香化合物多能发生荧光。脂肪族化合物往往与荧光试剂作用后才可产生荧光。 名 称 结 构 式 应 用 9-蒽基重氮甲烷 某些羧酸 丹磺酰氯 伯胺、仲胺、酚或氨基酸 CH2N2 N(CH3)2 SO2Cl 锌(Ⅱ)存在下诺氟沙星与牛血清白蛋白的结合作用 以λex=280 nm，分别加入NFLX和Zn(II)后，BSA的最大荧光峰位置不变，但是荧光强度均降低，这说明NFLX和BSA以及Zn(II)和BSA之间存在相互作用，发生了能量转移，可见NFLX和Zn(II)对BSA的均有荧光猝灭作用。 鱼腥草中钛含量分析 钛与苯基荧光酮生成 络合物及相应空白的吸收光谱 钛与苯基荧光酮生成橙色络合物， 最大吸收波长为5 4 0 n m， 试剂空白的最大吸收 波长为4 6 0 n m， 故选定测量波长为5 4 0 n m. 鱼腥草中钛含量分析 谢谢！ * 希望大家喜欢，我讲话比较快的，我会尽量控制语速啊~ * * 啊？ * * * * S为电子自旋角动量量子数的代数和，它的数值为0、1。电子激发态的多重性为2S+1。 * 这两种衰变过程可以导致激发能转化为热能传递给介质。 * 图中，s0.s1.s2分别表示分子的基态.第一和第二电子激发单重态， T1t2分别表示第一第二电子激发三重态。 降落到第一电子激发态的最低振动能级的分子继续降 落到基态的各个不同振动能级，同时发射出相应的光量子，这就是荧光 振动松弛是指分子将多余的振动能量传递给介质而衰变到同一电子态的最低振动能级的过程。 内转化是指相同多重态的两个电子态之间的非辐射的跃迁过程。 系间窜越是指不同的多重态的两个电子态间的非辐射跃迁的过程 * * 这样，很容易理解共轭pi体系越大 ，离域pi离子就容易被激发，荧光（磷光）就越容易产生. * 也与狭缝的宽度有关。为了得到分离度好、选择性高的谱峰，必须选择窄的狭缝宽度，以免发生光的散射和外来光的干扰，但同使也降低了灵敏度；适当加宽狭缝提高了灵敏度，但又往往难以得到分离度好的峰形，降低了选择性。因此，通常需要在得到选择性好的谱峰前提下，适当加宽狭缝，提高灵敏度。 * 诺氟沙星(NFLX，化学对照品，中国药品生物制品检定 所)，牛血清白蛋白(BsA，生化试剂，中国医药集团上海化 学试剂公司)，三羟甲基氨基甲烷(Tris，分析纯，中国医药 集团上海化学试剂公司)，盐酸、氯化钠、七永硫酸锌均为分 析纯。实验用水为二次蒸馏水，无荧光杂质 * * 2 ． 3 表面活性剂选择及用置 试验了乳化剂 O P、 T r i t o n — l 0 0 、 吐温一 8 0 、 十六烷 基三甲基溴化胺( C T M A B ) 对