全反式维甲酸ATRA.PPTVIP

汇报人：张 蕾 导 师：何俏军 教授 杨 波 教授 浙江大学 药学院 药理毒理与生化药学研究所 研究背景——ATRA 肿瘤的诱导分化疗法是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化(induction of differentiation)是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导剂的作用下，向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。 全反式维甲酸(ATRA)诱导分化治疗已成为治疗急性早幼粒细胞白血病的首选手段。 维甲酸耐药的机制可能与维甲酸分解代谢作用增强、与胞浆维甲酸结合蛋白的结合增强等作用相关。 MDM2 p53 Apoptosis Cell cycle arrest DNA repair … Degradation Nuclear export 2 3 1 研究背景——Nutlins MDM2 p53 Stratege1 Stratege2 Stratege3 （Nutlins） 研究结果及结论1 MTT法 PI单染结合流式细胞术 * Nutlin-1仅对p53野生型的白血病细胞具有一定的增殖抑制及凋亡诱导作用，对p53突变或缺失的白血病细胞无细胞毒作用。 ？Nutlin-1是否与ATRA具有协同诱导白血病细胞分化的作用？若有，则其分子机制是否与p53相关？ 研究结果及结论2 CD11b% Counts CD11b表面抗原检测 NBT还原实验 CD11b表面抗原检测 台盼蓝染色结合细胞计数 * Nutlin-1仅对HL60或NB4细胞株（p53突变或缺失）具有一定的增强ATRA分化诱导能力的作用，而对U937 （p53野生型）无增强作用。 ？Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用是否必须在p53无功能的细胞株中才能体现？ 研究结果及结论3 Western Blotting法 CD11b表面抗原检测 * Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用与p53无关。 ？Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用机制是什么？ 研究结果及结论4 Real Time PCR法 JC1、Rhodamine123外排实验 MTT法 Western Blotting法 * ATRA能够在HL60及NB4细胞中诱导p-gp的高表达，但不能在p53野生型或p53缺失的U937细胞中诱导p-gp的高表达。 ？ATRA诱导p-gp高表达的现象是否与Nutlin-1增强ATRA分化诱导能力的作用相关？ 研究结果及结论5 p-gp ATPase 活性检测 Nutlin-1a Nutlin-1b Western Blotting法 Real Time PCR法 * Nutlin-1与ATRA均为p-gp的底物，Nutlin-1与ATRA共同作用时能够抑制ATRA的外排，增强ATRA的分化诱导作用。 研究结论 ATRA ATRA ATRA Nutlin-1 HL60/NB4 cells p-gp ATRA Nutlin-1增强分化能力的作用仅在经ATRA诱导高表达p-gp的细胞株中发挥，而与p53通路无关。 Thank you！