2019年基因工程的基本操作程序1.pptVIP

基因工程的基本操作程序;;一、目的基因的获取;;;3)基因组DNA文库与cDNA文库;;依据：目的基因的有关信息。 如： 根据基因的核苷酸序列 基因的功能 基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质等特性;1、构建基因组DNA文库时，首先应分离细胞的 A、染色体DNA?? B、线粒体DNA C、总mRNA?? D、tRNA ;2、利用PCR技术扩增目的基因;PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 通过此技术，可获取大量的目的基因。; 以 方式扩增， 即 （n为扩增循环的次数）;前提： 条件 ;PCR技术的操作过程;PCR技术扩增与DNA复制的比较;反转录法;变式迁移;2．你能否用DNA连接酶将下列末端连接起来？ (1)…CTGCA (2)…AC (3)GC… …G　　　 …TG　　　 CG… (4)…G (5)　　　G… (6)…GC …CTTAA　　　 ACGTC… …CG (7)GT… (8)AATTC… CA…　　　 G… ;答案：(2)和(7)能连接形成…ACGT… …TGCA… (4)和(8)能连接形成…GAATTC… …CTTAAG… (3)和(6)能连接形成…GCGC… …CGCG… (1)和(5)能连接形成…CTGCAG… …GACGTC…;3、在遗传工程中，若有一个控制有利性状的DNA分子片段为ATGTG／TACAC，要使其数量增多，可用PCR技术进行人工复制，复制时应给予的条件是 ①双链DNA分子为模板 ②ATGTG或TACAC模板链 ③四种脱氧核苷酸 ④四种核苷酸 ⑤DNA聚合酶 ⑥热稳定DNA聚合酶⑦引物 ⑧温度变化 ⑨恒温 A．①③④⑦⑨ B．①④⑥⑦⑧ C．②⑤⑥⑦⑨ D．①③⑥⑦⑧;4、在基因工程中，把选出的目的基因（共1000个脱氧核苷酸对，其中腺嘌呤脱氧核苷酸是460个）放入DNA扩增仪中扩增4代，那么，在扩增仪中应放入胞嘧啶脱氧核苷酸的个数是 A.540个 B.8100个 C.17280个 D.7560个;5、在已知序列信息的情况下，获取目的基因的最方便方法是 A、化学合成法? ? B、基因组文库法 C、cDNA文库法?? D、聚合酶链反应;二、基因表达载体的构建 —???基因工程的核心;2、基因表达载体的组成：;启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质 终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录 标记基因的作用是为了鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将有目的基因的细胞筛选出来;①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。;启动(终止)转录;三.将目的基因导入受体细胞;1、将目的基因导入植物细胞的方法： （1）农杆菌转化法 ①农杆菌特点：;③过程：;（2）基因枪法 （3）花粉管通道法;2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②程序： ;3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点： 繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： ; 四、目的基因的检测与鉴定;1、鉴定——分子水平的鉴定;1、鉴定——分子水平的鉴定;1、鉴定——分子水平的鉴定;思考？;2、鉴定——个体水平的鉴定;变式迁移;点评：(1)涉及目的基因的检测与鉴定习题时，应注意审题，辨清是要求从“分子水平”还是从“个体水平”。 (2)DNA探针及其应用 ①DNA探针是指用荧光或放射性同位素标记的DNA分子，其应用依据的原理是DNA分子杂交。