黄瓜紫黄质脱环氧化酶相似基因CsVDL启动子缺失分析-李欣.DOCVIP

PAGE PAGE 3 中国农业大学 本科生“URP”立项申请书 项目名称 黄瓜紫黄质脱环氧化酶相似基因（CsVDL）启动子缺失分析 申 请 人 李欣 工作单位 园艺学院 联系电话 010 电子信箱 HYPERLINK mailto:xinl@cau.edu.cn xinl@cau.edu.cn 填表日期 2018年12月25日 中国农业大学本科生院制 项目名称 黄瓜紫黄质脱环氧化酶相似基因（CsVDL）启动子缺失分析 项目起止时间 2019.3-2020.3 项目申请人情况 姓名 李欣 性别 女 出生日期 1985.02 最后学历与学位 博士 专业技术职务 讲师 从事专业 蔬菜学 项目概况 黄瓜(Cucumis sativus L.)是我国以及世界范围内栽培面积大，种植范围广的重要蔬菜作物之一。黄瓜起源于亚热带，是一种喜温暖而不耐高温强光的蔬菜，强光易导致黄瓜幼苗的生理代谢失调，引起光抑制发生，生长受到抑制。据报道，当植物生长在强光并同时存在其他环境胁迫时，将会加剧光抑制现象，黄瓜在冬季保护地栽培时，低温条件胁迫下，即使中等强度的光强也会使其发生光抑制，对黄瓜生产造成较大损失。因此，阐明其强光照引起的光抑制的生理与分子机制，从强光胁迫调控方面进行生理与分子方面的探索，对于弄清黄瓜对强光的抗逆性机理和黄瓜育种及栽培等方面都有十分重要的理论和实际意义。 依赖于叶黄素循环的热耗散是植物耗散过剩能量，防御光破坏的一个重要途径。强光下，在紫黄质脱环氧化酶的作用下，紫黄质经脱环氧化形成花药黄质(A)，然后进一步脱环氧化形成玉米黄质(Z)，将过剩光能转变成热能耗散掉，从而保护植物免受强光破坏。黄瓜及大多数植物中存在紫黄质脱环氧化酶相关基因（VDR），并且其编码氨基酸序列与紫黄质脱环氧化酶（VDE）同源性较高，具有VDE超级家族的蛋白结构特征，与VDE相比，VDR在其N端具有与色素合成有关的BchH功能区域，推测可能其参与调节类胡萝卜素合成途径中从紫黄质到新黄质的合成，同时参与植物抗强光逆境响应，对于该基因启动子功能区域的研究和探索为植物抗强光逆境机理研究奠定新的分子理论依据。 二、实施计划及方案(明确各个环节对培养学生创新能力的具体思路及考核办法) 1. 文献查找与阅读 项目参加者学会引用关键词以及相关技术搜索到相关文献并进行阅读，学习撰写试验方案。该环节让学生学习查找以及阅读文献，调动学生对专业研究方向的兴趣。 考核办法：学生根据项目研究目的自拟一份实验方案及技术路线交给指导教师，由老师考核评分。 2. 试验环节 根据文献和启动子元件分析网站信息，设计CsVDL启动子不同的缺失片段，构建启动子缺失驱动GUS表达的植物表达载体，转化农杆菌并转化拟南芥，通过不同光照处理下GUS活性定量分析，推测其受光照诱导响应的启动子区域和元件，分析CsVDL基因启动子响应光逆境胁迫的调控机制。 该环节将很好地培养学生对实验操作过程中的动手能力和思考能力，培养学生独立完成实验的能力。 考核办法：小组成员定期做进展工作报告，指导教师定期与学生交谈实验过程中的问题及想法，解答疑问，在此基础上对学生进行考核评定。 三、项目实施的基础和条件 申请人课题组在紫黄质脫环氧化酶参与的叶黄素循环代谢途径研究领域中已有一定工作基础，熟练掌握基因扩增、GUS染色等技术和方法；申请人实验室具备研究所需的室内外设施与仪器设备等条件，拥有良好的温室和人工气候室条件，可以保证实验计划的顺利实施。 四、学生提交的成果 1、项目的结题报告1份。 2、提交PPT汇报材料，并完成验收。 五、经费预算 项目预计花费5000元。 其中：1）用于载体构建所需酶购买；费用1000元； 2）转基因植株分子鉴定DNA提取所需试剂盒购买；费用1000元； 3）GUS染色液、乙醇等实验药品购买，2000元； 4）实验室测定的消耗性材料，1000元； 六、学院URP领导小组意见 签字 （盖章） 年 月 日