aCella-TOX细胞毒性检测试剂盒在Modulus微孔板多-原平皓生物.PDF

Turner BioSystems Applications Note aCella™ - TOX 细胞毒性检测试剂盒在 Modulus 微孔板多功能光度计上的应用 1. 应用说明 Turner 公司 Modulus 微孔板多功能光度计和 Cell Technology 公司的 aCella™-TOX 试剂盒联合使 用为细胞毒性检测提供了一种高灵敏度的检测方法。Cell Technology 公司是通过检测哺乳动物细胞或 者细菌细胞的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）活性来定量细胞毒性，aCella-TOX 试剂盒的检测量最 低可达 5 个细胞/100ul 培养液。 在糖酵解过程中甘油醛-3-磷酸脱氢酶催化 3-磷酸甘油醛(GAP)转化成 1,3-磷酸甘油酸酯(1,3-BPG)的 氧化磷酸化反应，1,3-BPG 在磷酸甘油酸酯激酶(PGK)作用下脱磷酸产生 ATP ，ATP 可以通过萤光素 酶/萤光素生物化学反应发光检测而定量。 ModulusModulus 微孔板多功能光度计采用独特的光检系统使得在 aCella-TOX 试剂盒分析中能达到 最高灵敏度和最宽线性范围。检测使用 aCella-TOX 试剂盒 (Cell Technology, Inc. Catalog #CLATOX 100-3, #CLATOX 100-4)。 2. 所需器材 ModulusModulus 微孔板多功能光度计(P/N 9300-001 或 9300-002，9300-003) 白色不透明96 孔板(EK Scientific EK-25075) Cell Technology aCella-TOX 检测试剂盒。 北京原平皓生物技术有限公司 电话: 010803 传真: 010 E-mail: order@ Web: Turner BioSystems Applications Note 图 1：将不同浓度的Jurkat 细胞铺板，每孔加入 NP-40 细胞毒性分析试剂，采用 aCella-TOX 来检测 G3PDH 酶活性，图中数据点 RLU 为三次测量平均值。 3. 实验方案 3.1 试剂制备 小瓶 A：酶检测试剂（4 ×） 试剂瓶 A：酶检测稀释液A 小瓶 B：检测试剂（50×），含萤光素酶/萤光素底物 试剂瓶 B：检测试剂稀释液 B （5.5×） 小瓶 C：三磷酸甘油醛 G3P 小瓶 D：5×裂解试剂 3.1.1 使用前，置于冰上解冻试剂 A （4 × 浓缩液），配制 2×工作液，按照 1:2 的比例将4 ×的酶检 测稀释液 A 和酶检测试剂 A 稀释。 3.1.2 分装后，在至少-70°C 条件下冻存剩余小瓶试剂 A 3.1.3 接下来，快速解冻小瓶试剂 C。每毫升 2×酶检测试剂中加入3.5ul 的小瓶试剂 C，配制试剂要 足够当天实验所需。在低于-70°C 条件下，剩余的 2×酶检测试剂两周内活性不会损失。 3.1.4 解冻试剂瓶 B(5.5X 浓缩液)，使用前用试剂级去离子水按 1:5.5 倍稀释。 3.1.5 分装剩余试剂保存在-20°C 到-70°C 条件下。 3.1.6 使用前，置于冰上解冻小瓶 B 中试剂(检测试剂 50X 浓缩液)。 3.1.7 分装并-70°C 冻存剩余试剂。 3.1.8 向样品中加入检测试剂前，用检测试剂稀释液 B 按 1:50 倍比例稀释。 3.1.9 向每个样品中各加 50ul 注：混合试剂避光保存。 3.1.10 使用前用去离子水按 1:5 倍比例稀释小瓶 D 中试剂，稀释试剂可室温保存。 注：使用其他裂解试剂会干扰测量信号，TritonX 100 会严重抑制发光信号。 注：所有试剂避免反复冻溶。 3.2 仪器安装 3.2.1 双击 Modulus 图标运行软件。 3.2.2 在Welcome to Modulus对话框中点击Create New Protocol 3.2.3 提示有新的工作方案生成时，选择0 injectors。 3.2.4 首次运行前修改延迟时间，测量次数和重复测量延迟时间，Integration time选择为 1s。 3.2.5 接下来，选择想要检测的孔。可以选择Save Protocol As以便将来使用，或者选择Finish 不保存运行该方案。 3.3 样品分析－细胞毒素 北京原平皓生物技术有限公司