甘蔗叶内生真菌的多样性.pdf

江苏农业科学　２０１７年第４５卷第１６期 — ９３— 周　宁，赵晓璐，谢庆武，等．甘蔗叶内生真菌的多样性［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（１６）：９３－９５． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．１６．０２３ 甘蔗叶内生真菌的多样性 周　宁，赵晓璐，谢庆武，白先放 （广西大学生命科学与技术学院，广西南宁５３０００４） 　　摘要：从甘蔗叶中分离出内生真菌并对其多样性进行分析。结果发现，从不同季节和不同叶片部位的甘蔗叶中共 分离到１７２株内生真菌，通过菌落形态学特征和ＩＴＳ序列鉴定这些内生真菌分属为８属 １０种；从夏季的叶片中分离 到６属８种，冬季的叶片中分离到７属９种；从老叶中分离到全部的８属１０种，幼叶中分离到５属６种。主要优势种 为曲霉属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐ．）和炭疽菌属（Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉｃｈｕｍｓｐ．），两者占总菌株分离数的８５％以上。 　　关键词：甘蔗叶；内生真菌；多样性；分离；鉴定 　　中图分类号：Ｓ１８２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）１６－００９３－０３ 　　植物内生真菌（ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃｆｕｎｇｉ）是指其生活史中的部分 活性氯含量为２．２％的次氯酸钠溶液浸泡消毒５ｍｉｎ，无菌水 或全部阶段定植于健康植物组织内，不造成宿主植物明显伤 冲洗３次；然后用体积分数为７５％的乙醇浸泡消毒１ｍｉｎ，无 ［１］ 害的真菌，包括表生的腐生菌、潜伏性的病原菌和菌根菌 。 菌水冲洗３次；用无菌剪刀将消毒后的叶片剪碎至长为２～ 研究表明，植物内生真菌具有多种应用价值，其部分代谢产物 ４ｍｍ的小块，分别置于 ＰＤＡ平板上，每板等距放置７块， ［２］ ［３］ ［４］ 具有抗肿瘤 、抗菌 、抗氧化 等多种药用活性；植物内生 ２８℃下培养３～５ｄ。待叶片周围长出足量菌丝体后，依据 真菌与其宿主植物同样也有较为紧密的关系，能够调节宿主 真菌的形态特征并采用平板划线法进行菌株的纯化。纯化后 ［５］ ［６］ 植物的生长发育 、增强宿主植物的抗逆性 ，影响宿主植 的菌种保存至４℃冰箱备用。 ［７］ 物根部的土壤环境及微生物群落 和生物防治植物病虫害 １．２．２　内生真菌的鉴定　菌落形态特征：取纯化后的菌种接 ［８］ 等 。甘蔗是重要的制糖经济作物，我国南方等地均有广泛 种至ＰＤＡ培养基上培养，定期观察、记录各菌株生长过程中 种植，甘蔗叶作为甘蔗植株进行光合作用的主要部位，其内生 的菌落形态特征，并依据《真菌鉴定手册》进行初步鉴定。 真菌的多样性分布可能对甘蔗植株的糖产量及品质有较高影 分子生物学鉴定：取纯化后的菌种经 ＰＤＢ发酵后采用 响，但国内对甘蔗叶内生真菌的种类及分布情况鲜有研究。 ＤＮＡ提取试剂盒进行总 ＤＮＡ的提取，使用真菌通用引物 本研究主要对甘蔗叶内生真菌进行分离及鉴定，以期了解甘 ＩＴＳ１（５′－ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ－３′）和 ＩＴＳ４（５′－ 蔗叶内生真菌的多样性，为合理开发利用甘蔗叶内生真菌资 ＴＣＣＴＣＣＧＣＴＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ－３′）扩增其５．８ＳｒＤＮＡ－ＩＴＳ序 源提供依据。 列。扩增产物回收纯化后由深圳华大基因测序。 １．２．３　数据处理与分析　测序后得到的ＩＴＳ序列在ＮＣＢＩ数 １　材料与方法 据库中进行相似性检索，并通过软件 ＭＥＧＡ６．