荔波连蕊茶GA2ox1基因的克隆及表达分析.pdfVIP

林业科学研究　２０１６，２９（１）：４１ ４７ ＦｏｒｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ 　　文章编号：１００１１４９８（２０１６）０１００４１０７ 荔波连蕊茶ＧＡ２ｏｘ１基因的克隆及表达分析 １，２ ２ ２ ２ ２ 肖　政 ，李纪元 ，范正琪 ，李辛雷 ，殷恒福 （１．江苏省农业科学院园艺研究所／江苏省高效园艺作物遗传改良重点实验室，江苏 南京 　２１００１４； ２．中国林业科学研究院亚热带林业研究所，浙江 杭州　３１１４００） 摘要：［目的］ＧＡ２氧化酶是赤霉素生物合成代谢过程中关键酶之一，ＧＡ２ｏｘ家族基因常被用于植物矮化基因工程 育种。［方法］根据植物ＧＡ２氧化酶基因编码区的保守序列设计引物，以山茶属荔波连蕊茶嫩枝为材料，提取总 ＲＮＡ，进行ＲＴＰＣＲ。采用ＲＡＣＥ技术扩增获得１３７１ｂｐ的ＧＡ２ｏｘ基因全长ｃＤＮＡ序列，命名为ＣｌＧＡ２ｏｘ１（ＧｅｎＢａｎｋ 登录号ＫＪ５０２２９０）。［结果］序列分析表明，ＣｌＧＡ２ｏｘ１放阅读框（ＯＲＦ）为１００２ｂｐ，编码３３３个氨基酸，５’非编码区 ５９ｂｐ，３’非编码区３１０ｂｐ。预测的蛋白质分子量为３７．３１ｋＤ，等电点为５．９２，具有ＧＡ２ｏｘ超基因家族的保守结构域 和特有的氨基酸残基。ＣｌＧＡ２ｏｘ１蛋白与ＧｅｎＢａｎｋ中收录的其它植物ＧＡ２ｏｘ蛋白氨基酸的相似性达到８０％。构建 系统进化树，结果显示山茶ＧＡ２氧化酶与烟草ＧＡ２ｏｘ蛋白的亲缘关系最为密切。实时定量ＰＣＲ结果显示，该基因 在荔波边蕊茶不同器官及发育不同时期的均有表达，表达量有所不同：ＣｌＧＡ２ｏｘ１基因在２年生茎段中的表达量最 高，在嫩枝和根中也有较高的表达，而在新抽生的嫩叶中最低。［结论］试验结果为进一步明确 ＣｌＧＡ２ｏｘ１基因的功 能特征及揭示其参与调控植物生长的分子机制奠定基础。 关键词：荔波连蕊茶；ＧＡ２氧化酶：实时荧光定量ＰＣＲ；克隆 中图分类号：Ｓ７１８４６ 文献标识码：Ａ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＧＡ２ｏｘ１ＧｅｎｅｆｒｏｍＣａｍｅｌｌｉａｌｉｐｏｅｎｓｉｓ １，２ ２ ２ ２ ２ ＸＩＡＯＺｈｅｎｇ ，ＬＩＪｉｙｕａｎ，ＦＡＮＺｈｅｎｇｑｉ，ＬＩＸｉｎｌｅｉ，ＹＩＮＨｅｎｇｆｕ （１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＪｉａｎｇｓｕＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＪｉａｎｇｓｕＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｌＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ， Ｎａｎｊｉｎｇ　２１００１４，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｕｂｔｒｏｐｉｃａｌＦｏｒｅｓｔｒｙ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＦｏｒｅｓｔｒｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１１４００，Ｚｈｅｊｉａｎｇ，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ２ｏｘｉｄａｓｅｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｋｅｙｅｎｚｙｍｅｓｉｎＧＡｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，ａｎｄＧＡ２ｏｘｇｅｎｅｓａｒｅ ｏｆｔｅｎｕｓｅｄｔｏｄｗａｒｆｐｌａｎｔｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇｂｒｅｅｄｉｎｇ．Ｉｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ，ｔｈｅｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ２ｏｘｉｄａｓｅｇｅｎｅｗａｓｃｌｏｎｅｄｆｒｏｍｔｈｅ ｓｔｅｍｓｏｆＣａｍｅｌｌｉａｌｉｐｏｅｎｓｉｓｕｓｉｎｇＲＴＰＣＲａｎｄＲＡＣＥｍｅｔｈｏｄｓ．ＴｈｅｆｕｌｌｌｅｎｇｔｈｏｆｔｈｅＧＡ２ｏｘｇｅｎｅ，ｎａｍｅｄ ＣｌＧＡ２ｏｘ１，ｉｓ１３７１ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋａｃｃｅｓｓｉｏｎＮｏ．ＫＪ５０２２９０），ｗｈｉｃｈｃｏｎｔａｉｎｓａ１００２ｂｐｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｅｎｃｏ ｄｉｎｇ３３３ａｍｉｎｏａｃｉｄｒｅｓｉｄｕｅｓ，ｃｏｎｔａｉｎｓａ５’ＵＴＲｗｉｔｈ５９ｂｐａｎｄ３’ＵＴＲ３１０ｂｐ．Ｔｈｅｐｕｔａｔｉｖｅｐｒｏｔｅｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｗｅｉｇｈｔｉｓ３７．３１ｋＤａｎｄｉｔｓｔｈｅｏｒｅｔｉｃ