固体平板转化法测细菌质粒DNA的水平转移现象.pptVIP

固体平板转化法检测细菌 质粒DNA的水平转移现象 实验目的 1、了解细菌水平基因转移的主要途径、基本原理； 2、学习大肠杆菌固体平板转化实验的基本方法。 许多细菌可以建立自然感受态，能从环境中摄取DNA改变自身遗传结构，获得新的表型。细菌转化是水平基因转移的重要途径之一。 Dubnau, Annu Rev Microbiol, 1999 53:217-44 大肠杆菌氯化钙平板转化方法 1、菌种活化：挑取大肠杆菌单菌落接种于 5 mL LB培养基中，37℃振荡培养过夜； 2、菌液准备 （1）按1/100转接量，转接于50 mL新鲜LB培养基中，37℃振荡培养至OD600 = 0.5~0.55（3 h 左右）。 （2）按3 mL分装到无菌试管中，置冰浴。 3、转化选择平板准备 先摇匀融化好的150 mL的LB，在 50~60℃时，加入150 ?L 100 mg/mL的氨苄青霉素（终浓度100 ?g/mL），混匀，倒 9块平板（每组4块）； 置45℃预热； 4、感受态制备及转化（按4人小组进行） （1）用移液器取1 mL菌液于1.5 mL 微量离心管中，每小组取2支；冰浴冷却5~10 min； ★ 冰浴很重要！已冰浴的菌液可适当缩短冷却时间。 （2）12 000 r/min离心30 s，弃