杭州市正常水禽中主要血凝性病毒的检测-预防兽医学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文摘 浙江大学硕士学位论文 摘 要 采集临床正常鸭子泄殖腔棉拭子经0．22微米过滤除菌，并用先锋Ⅵ作用后 接种10日龄的鸡胚，盲传3代。对收获的尿囊液进行HA试验，将具有血凝性 的尿囊液与ND标准阳性血清、禽流感H9和H5标准阳性血清、鸡减蛋综合症标 准阳性血清进行血凝抑制试验鉴定，结果分离到了5株新城疫病毒和1株H5禽 流感病毒。 其中分离到NDV的1号分离株和2号分离株的第2代、第3代鸡胚全身出血， 以头部、足趾、翅膀出血尤为明显。H5亚型禽流感病毒致死胚也出现严重的全 身出血症状，鸡胚死亡时间在24～60小时左右。 本研究根据AIV保守片段NP片段进行引物设计，以确定A型流感病毒的存 在。在此基础上，选择禽流感病毒亚型决定片段IiA基因为目的基因，设计8节 段基因共同引物及HA基因特异性引物，以进一步鉴定其亚型及分析其致病性两 次RT-PCR扩增及HA全基因测序分析，提高了检测的敏感性，且避开了由于 HA基因在裂解位点的突变而导致的PCR的失败。 对分离病毒的尿囊液进行AIV的RT-PCR检测，结果均扩增出特异性的目的 条带，对RT-PCR产物的克隆测序与BLAST比较结果进一步验证了该检测系统的 可靠性。将该AIV毒株克隆测序所测得的序列用DNA Star软件分析其编码的氨 基酸序列。 将序列提交NCBI进行BlastP比对发现与很多已经发表过的鸭源流感病