透析已成为生物化学试验.pdf

中国试剂网 3.15.2.34 如何使用透析袋 自Thomas Graham 1861 年发明透析方法至今已有一百多年。透析已成为生 物化学实验室最简便最常用的分离纯化技术之一。在生物大分子的制备过程中， 除盐、除少量有机溶剂、除去生物小分子杂质和浓缩样品等都要用到透析的技术。 透析只需要使用专用的半透膜即可完成。通常是将半透膜制成袋状，将生物 大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子 量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋 内外两边的浓度达到平衡为止。保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留 液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。 透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速 度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶质在膜内外两边的浓度梯度，还正 比于膜的面积和温度，通常是4 ℃透析，升高温度可加快透析速度。 透析膜可用动物膜和玻璃纸等，但用的最多的还是用纤维素制成的透析膜， 目前常用的是美国Union Carbide （联合碳化物公司）和美国光谱医学公司生产 的各种尺寸的透析管，截留分子量 MwCO （即留在透析袋内的生物大分子的最 小分子量，缩写为MwCO ）通常为1 万左右。 商品透析袋制成管状，其扁平宽度为23 mm～50 mm 不等。为防干裂，出 厂时都用 10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外 吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。可先用 50 ％乙醇煮沸1 小时，再依次用50 ％乙醇、0.01 mol/L 碳酸氢钠和0.001 mol/L EDTA 溶液洗涤，最后用蒸馏水冲洗即可使用。实验证明，50 ％乙醇处理对除去 具有紫外吸收的杂质特别有效。使用后的透析袋洗净后可存于4 ℃蒸馏水中，若 长时间不用，可加少量NaN2 ，以防长菌。洗净凉干的透析袋弯折时易裂口，用 时必须仔细检查，不漏时方可重复使用。 新透析袋如不作如上的特殊处理，则可用沸水煮五至十分钟，再用蒸馏水洗 净，即可使用。使用时，一端用橡皮筋或线绳扎紧，也可以使用特制的透析袋夹 夹紧，由另一端灌满水，用手指稍加压，检查不漏，方可装入待透析液，通常要 留三分之一至一半的空间，以防透析过程中，透析的小分子量较大时，袋外的水 和缓冲液过量进入袋内将袋涨破。含盐量很高的蛋白质溶液透析过夜时，体积增 中国试剂网 3.15.2.34 加 50 ％是正常的。为了加快透析速度，除多次更换透析液外，还可使用磁子搅 拌。透析的容器要大一些，可以使用大烧杯、大量筒和塑料桶。小量体积溶液的 透析，可在袋内放一截两头烧园的玻璃棒或两端封口的玻璃管，以使透析袋沉入 液面以下。 检查透析效果的方法是：用1％ BaCl2 检查(NH4)2SO4，用1％ AgNO3 检 查NaCl 、KCl 等。 为了提高透析效率，还可以使用各种透析装置。使用者也可以自行设计与制 作各种简易的透析装置。美国生物医学公司（Biomed Instruments Inc. ）生产的各 种型号的Zeineh 透析器，由于使用对流透析的原理，使透析速度和效率大大提 高。