应激状态下肠上皮细胞凋亡水平的变化及其机制-中华危重病急救医学.PDFVIP

维普资讯 ·268 · 中国危重病急救医学 2005年 5月第 17卷第 5期 ChinCritCar! ! ! !：!! ： · 论 著 · 应激状态下肠上皮细胞凋亡水平的变化及其机制 周静 王杉 叶颖江 杨棠 崔志荣 【摘要】 目的 探讨在氧化应激状态下肠上皮细胞凋亡水平 的变化 以及凋亡异常发生的分子机制。 方法 使用过氧化氢 (HO)处理培养的HT一29细胞模拟机体活性氧(ROS)损伤肠上皮细胞的体 内状况，采 用四甲基偶氮唑盐 (MTT)微量酶反应 比色法进行细胞生存力的检测 ；采用流式细胞术进行细胞凋亡的检测I 采用蛋 白质免疫印迹法(Westernblot)检测凋亡相关蛋 白的表达 。结果 H0 可降低HT一29细胞生存率， 且呈现剂量依赖性和时间依赖性 (P均d0．05)；与空白对照组相 比，随着H0 浓度的增高，细胞凋亡率增加 (P均d0．05)，随着作用时间的延长 ，细胞凋亡率也增加 (PO．05)；以不同浓度 H0 刺激 HT一29细胞24h 后发现 ，与空白对照组相 比，Bax的表达随着 H0 浓度的增高而增加 ，Bcl一2的表达随着H0 浓度的增高而 降低。以500／lmol／L浓度的H0 刺激HT一29细胞发现，Bax表达随着 H0 作用时间延长而增加 ，Bcl一2 表达随着H0 作用时间延长而降低。结论 应激状态下，肠上皮细胞氧化应激水平与其凋亡程度相关 ，凋亡 调控蛋 白Bcl一2／Bax比值失调可能是肠上皮细胞凋亡过度的机制之一。 【关键词】 应激 ； 凋亡 ； Bcl一2； Bax Change in apoptosisand itsmechanism in intestinalepithelialcellsunderoxidativestress zHoU Jing， NGShan，yE Ying—jiang，YANGShen，CUIZhi—tong．DepartmentofGastroenterologicalSurgery， People’sHospitalof PekingUniversity。Beijing100044，China Correspondingauthor： AⅣGShan(Email：shanwang60@sina．com) [Abstract】 Objective To investigatechangeinapoptosisleveland itsmechanism ofintestinal epithelialcellsunderoxidativestress．M ethods HT 一29cellswerecultured invitro。whichweretreated withhydrogenperoxide(H2O2)，tOsimulatetheintestinalepithelialcellsinjuredbyreactiveoxidativespecies． Thecellsviabilitywasobservedby3一(4，5一dimethylthiazol一2一y1)一2，5一diphenyltetrazolium bromide (MTT)assay．M oreover，cellapoptosisandapoptosisassociatedproteinswereevaluatedbyflow cytometry andW esternblot．Results CellsviabilityofHT 一29wasdecreasedbyH2O2whichshoweddose—dependent andtime—dependentpatterns(allP0．05)．Thecellapoptoticratioswereincreasedwith theconcentration ofH2O2increased and thetimeofthestimulationprolonged comparedwith thecontrols(allP 0．05)． Although the expression ofthe Bax was increased when HT 一29cells werestimulated with different concentrationsofH2O2for24hours，theexpression