柞蚕Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂ApKTSPI基因克隆-应用昆虫学报.PDF

应用昆虫学报Chinese Journal of Applied Entomology 2014, 51(4): 1003−1013. DOI: 10.7679/j.issn.2095−1353.2014.119 柞蚕 Kazal 型丝氨酸蛋白酶抑制剂ApKTSPI 基因克隆及表达特征分析* ** *** 王 磊 邱建烽 钱 岑 朱保建 刘朝良 （安徽农业大学生命科学学院，合肥 230036 ） 摘 要 【目的】 克隆柞蚕（Antheraea pernyi ）Kazal 型丝氨酸蛋白酶抑制剂（ApKTSPI ）基因的cDNA 序列并进行序列分析，研究 ApKTSPI 基因的组织表达分布及病原物免疫刺激后的表达模式，原核表达 ApKTSPI 。【方法】利用RACE-PCR 方法扩增柞蚕ApKTSPI 基因全长cDNA ，生物信息学软件进行序列 分析，利用实时定量PCR 检测柞蚕ApKTSPI 基因的组织分布及免疫刺激后的表达模式，利用pET-28a 载 体在大肠杆菌BL21 中融合表达ApKTSPI 。【结果】柞蚕ApKTSPI 基因的cDNA 全长568 bp，开放阅读 框编码96 个氨基酸，含一个Kazal 结构域。ApKTSPI 基因在柞蚕5 龄幼虫脂肪体中特异性高表达，在核 型多角体病毒、大肠杆菌和白僵菌免疫刺激后表达量都能上调，但上调的程度和时间都不同。ApKTSPI 在大肠杆菌中成功诱导表达。【结论】获得了柞蚕ApKTSPI 基因的cDNA 全长，并研究了ApKTSPI 基因 的表达模式，为进一步研究其在柞蚕免疫中的功能及作用机理奠定了基础。 关键词 柞蚕，Kazal ，基因克隆，表达特征 Molecular cloning and expression profiles of a Kazal-type serine protease inhibitor gene in Antheraea pernyi ** *** WANG Lei QIU Jian-Feng QIAN Cen ZHU Bao-Jian LIU Chao-Liang (College of life science, Anhui Agricultural University, Hefei 230036, China) Abstract [Objectives] To clone full-length cDNA of a Kazal-type serine proteinase inhibitor in Antheraea pernyi (ApKTSPI), to analyze its expression level in tissue and in fat bodies after a pathogen’s immune-challenge, and to get it expressed in Escherichia coli. [Methods] ApKTSPI cDNA was amplified using the RACE-PCR method and the expression pattern analyzed using quantitative real time PCR. The ApKTSPI gene was inserted into the pET