青蒿法呢醇合酶原核表达纯化与功能鉴定.PDF

中国生物工程杂志 青蒿法呢醇合酶原核表达 纯化与功能鉴定 李振秋 金亚明 王 波 河北大学生命科学学院保定 摘要将经方法克隆到的青蒿倍半萜合酶 开放阅读框插入到原核表达 载体 的 和 酶切位点之间 构建 端和 端均携带有 表达标签的 重组表达载体 将 转入大肠杆菌 诱导蛋白表达 表达产物经镍琼脂糖柱纯化 纯化蛋白加入酶促反应体系 分析酶促反应体系的正己烷萃取物结果显示此重组酶可以催化向法呢醇的转化 关键词 法呢醇合酶 大肠杆菌表达 功能鉴定 青蒿 中图分类号 萜类化合物亦被称为萜组 是自然 合酶 合酶 和 界中结构相似但是数目众多的天然化合物组之一 迄 合酶 图 另外也有一些倍半萜合 今为止已发现了 余种萜类化合物由于每年还会 酶基因虽被克隆但是其具体功能并未鉴定这其中包 有大量的新结构化合物的报道因此这个数目还会不 括倍半萜合酶 前 断增长 萜类环化酶的多样性及其催化特异性造成 期工作显示单独原核表达此蛋白为包涵体形式表 的催化产物的多样性是萜类化合物的多样性的首要原 达因此其功能未能确定 本实验目的就是利用融合 因 因此萜类环化酶催化机理特别是催化特异性 基因技术将此基因进行融合表达促进其可溶性并 的揭示成为解决萜类化合物多样性的首要课题 通过 标签技术纯化后测定其功能获得更多的倍半 青蒿 的地上部分作为传统的 萜合酶序列和功能的对应关系数据 为进一步通过点突 中药几个世纪以来一直被用于治疗多种发热的疾病 世纪 年代发现青蒿中的一种倍半萜衍生物青蒿 素具有高效的抗疟活性 随后青蒿的植物化学方面的 研究多有报道 从叶片中分离鉴定出倍半萜化合物 有 这说明在青蒿中存 在着一大类倍半萜合酶催化产生如此众多的倍半萜类化 合物 据不完全统计从青蒿中分离的确定功能的倍半 萜合酶已有 个是单个植物中种类报道较多的 其