试验生物组织中可溶性还原糖脂肪蛋白质的鉴定.DOC

实验一 生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 ·实验指导（攻关不畏难） 目的要求： 初步掌握鉴定是生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质的基本方法； 识记鉴定所用材料、试剂、仪器，懂得选材的要求； 能熟练使用低倍镜，制作徒手切片、临时装片，了解规范使用显微镜的方法； 理解实验的目的、原理和方法步骤，进一步归纳出生物组织中可溶性还原糖、脂肪和蛋白质的鉴定原理。 材料用具 实验材料： 做还原糖的鉴定，应该选择含糖量较高、颜色为白色的植物组织，以苹果、梨为最好。 做脂肪的鉴定实验，应该选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好，实验前需浸泡3—4h。 做蛋白质的鉴定实验，可用浸泡1—2d的大豆种子（或用豆浆），或用鸡蛋蛋白。 仪器和试剂： 仪器：剪刀，解剖刀，双面刀片，试管，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，玻璃漏斗，酒精灯，三脚架，石棉网，火柴，研钵，石英砂，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜。 试剂：斐林试剂（主要由质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/mL的CuSO4溶液配制而成，）苏丹Ⅲ或苏丹Ⅳ染液，双缩脲试剂，体积分数为50%的酒精溶液，蒸馏水。 实验原理： 某些化学试剂能够使生物组织中的有机化合物产生特定颜色的反应。 可溶性还原糖的鉴定原理： 可溶性还原糖（如葡萄糖、果糖）与斐林试剂发生作用，可以生面碳红色沉淀，斐林试剂实际是Cu2+的碱性溶液，能使具有自由醛基或酮基的糖氧化，Cu2+则被还原成硕红色的Cu2O沉淀，反应式为： CH2OH—（CHOH）4—CHO+2Cu（OH）2 CH2OH—（CHOH）4—COOH+Cu2O +2H2O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液颜色变化过程为：浅蓝色 棕色 砖红色沉淀 脂肪鉴定原理： 脂肪可以被苏丹Ⅲ染成橘黄色（或被苏丹Ⅳ染成红色），苏丹Ⅲ在脂肪中的溶解度比在酒精中的溶解度大，当用苏丹Ⅲ的酒精溶液处理含有脂肪的生物组织时，酒精中的苏丹Ⅲ生进入脂肪中，将脂肪染成橘黄色。 蛋白质的鉴定原理： 蛋白质与双缩脲试剂发生作用，可以产生紫色反应。在碱性溶液（NaOH）中，双缩脲（H2NOC—NH—CONH2）能与Cu作用，形成紫色或紫红色的化合物，这个反应叫双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂（质量浓度为0.1g/mL的NaOH溶液和0.01g/mL的CuSO4）发生颜色反应。 方法步骤 可溶性还原糖的鉴定： 取材、研磨、过滤 取2ml组织样注入试管 制备生物组织样品 取样 注入试剂 向试管注入2ml 加热和观察 刚配制的斐林试 本实验的理想材料，比较颜色反应的程度，依次为：苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 斐林试剂很不稳定，故应将组成斐林试剂的甲液（0.1g/ml的NaOH溶液）和乙液（0.05g/mlCuSO4溶液）分别配制，储存，使用时再临时配制：将4—5滴乙滴入2ml甲中，配完后立即使用。 对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部，另外，试管口不要朝向实验者，以免沸腾的溶液冲出试管，造成烫伤。 脂肪的鉴定： 去种皮，削平面、切片 滴2—3滴苏丹Ⅲ染液，染色2—3分钟 制备生物组织实验材料 染色 去浮 色 在薄片上滴1—2滴体积分数为50%的酒精溶液，洗去浮色 制作临时装片 放 在显微镜下观察（先低倍镜，后高倍镜） 实验材料最好选用富含脂肪的种子，且徒手切片要成功； 若用花生种子作实验材料，必须提前浸泡3—4小时，浸泡时间短了，不容易切片，浸泡时间过长则组织太软，切的薄片不易成形。 如用苏丹Ⅳ染色，因苏丹Ⅳ与脂肪的亲和力比较强，所以，应染色时间不宜过长，染色1秒左右。 蛋白质的鉴定： 取材、研磨、过滤、预留组织样液 取1支试管注入黄豆组织样液2ml 制备生物组织样液 注入组织溶液 加入2ml双缩脲试剂A 再加入3—4滴双缩脲试剂B，摇匀 注入试剂A 注入试剂