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代谢工程 1: metabolic control analysis (MCA) 代谢控制分析 葡萄糖 ↓ 丁二醇、丙酸、乳酸等←丙酮酸→乙醛→乙醇 ↓ 乙酰CoA →乙醇 或乙酸 ↓ 三羧酸循环 ↓ 各种氨基酸、细胞组成产物、代谢产物等 method 1: metabolic control analysis (MCA) 代谢控制分析 人们采取某种措施控制胞内通量分布来找到那些对产物合成有重要影响的关键分支点和关键酶，研究个体酶的动力学性质，分析酶促反应对代谢通量的敏感性，从而控制通量分布。 　 MCA 是研究分析代谢途径中代谢控制在各个反应步骤之间如何分配的理论。可以用数学形式表达，并与实验方法相结合，对细胞代谢的调控问题提出定量的解释。 　MCA的 基本理论  MCA的基本研究对象是由代谢反应步骤和代谢反应途径组成的代谢系统，单个反应步骤是组成系统的基本单元。 MCA 认为代谢系统中所有反应步骤都对代谢通量和代谢物浓度进行控制, 因此对其中一个反应步骤施加微扰而产生的代谢通量（或代谢物浓度）变化的大小，可以作为代谢系统分析理论的基本概念。 再结合直线式代谢系统的结构约束条件，可以导出总和原理和连通原理。 １）控制系数 是对代谢系统中某一步反应施加一个微小扰动，所引起代谢通量或代谢物浓度的相对变化与该反应的反应速度 v 相对变化之比，即：CA=(dA/A)/(dv/v) 式中A--代表代谢通量， CA---通量的控制系数。 例如：A代表代谢物的浓度，则CA 为该步骤代谢物的浓度控制系数。 表示每一步骤对控制作用的强弱。越小越好。 ２）弹性系数 是指对某一步反应的某一参数 p（如底物、产物、酶浓度、温度、效应物等）进行微扰，所引起的反应速度 vi的相对变化与参数的相对变化之比。 弹性系数 = (dv/v) / (dA/A)， 即越大越好，即对反应的影响越大。 线状的λDNA侵入大肠杆菌K12细胞内时，首先环合成为环状DNA，两边粘性末端配对，结合形成的缺口由DNA连接酶封闭。 λ噬菌体感染了寄主细胞之后， λDNA可选择溶源或溶菌两条途径之一。究竟是发生溶菌反应还是溶源反应，这要由CI基因和cro基因编码的蛋白质同λ噬菌体的两个操纵基因 （OL，OR）之间的相互作用来决定，参见图 3-11。 2 λ噬菌体DNA复制 　　代谢控制分析定义通量控制系数、浓度控制系数、弹性系数等表征参数，通过对它们进行比较即可找到限制性步骤和关键酶，为代谢工程提供目标位点。 常用的是一种基于扰动-响应的方法，即通过基因工程手段或加入抑制剂改变特定酶的水平或活性，或者改变环境条件,如底物、中间化合物、产物浓度等的改变，考察其对通量分布的影响而求得各个参数。 MCA 线状的λDNA侵入大肠杆菌K12细胞内时，首先环合成为环状DNA，两边粘性末端配对，结合形成的缺口由DNA连接酶封闭。 λ噬菌体感染了寄主细胞之后， λDNA可选择溶源或溶菌两条途径之一。究竟是发生溶菌反应还是溶源反应，这要由CI基因和cro基因编码的蛋白质同λ噬菌体的两个操纵基因 （OL，OR）之间的相互作用来决定，参见图 3-11。 2 λ噬菌体DNA复制 　　总之，随着理论研究的深入，已发展到可以对含有分支途径、循环、酶-酶相互作用、级联反应等各种结构形式的代谢系统进行代谢控制分析。 2. metabolic flux analysis ( MFA,代谢通量分析) 用于分析：确定分支途径的优先合成,以及发现其它分支途径。 ＭＣＡ 线状的λDNA侵入大肠杆菌K12细胞内时，首先环合成为环状DNA，两边粘性末端配对，结合形成的缺口由DNA连接酶封闭。 λ噬菌体感染了寄主细胞之后， λDNA可选择溶源或溶菌两条途径之一。究竟是发生溶菌反应还是溶源反应，这要由CI基因和cro基因编码的蛋白质同λ噬菌体的两个操纵基因 （OL，OR）之间的相互作用来决定，参见图 3-11。 2 λ噬菌体DNA复制 MFA是根据代谢路径中各反应的计量关系、某些底物、产物的通量及细胞组成等确定整个代谢网络的通量分布。 　　该方法的基础是准稳态假设：假设细胞内的中间代谢物均处于准稳态，即浓度不变，可由 n个中间代谢物得到 n个关于速率的约束条件