莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体制备及应用-中国生物工程预印本.PDF

中国生物工程杂志 China Biotechnology 莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体制备及应用 1 1 刘雁霞 ，樊振川 天津科技大学大健康生物技术研究所，天津市大健康生物技术国际联合研究中心，天津科技大学食品工程与生物技术学院，天津 300457 摘要 [目的] 亮氨酸拉链转录因子 1 （LZTFL1）是一种与纤毛信号传导相关的蛋白，关于其如何在信 号传导中发挥作用以及作用机理目前尚不清楚。莱茵衣藻 （Chlamydomonas reinhardtii）是研究纤毛信 号传导的模式生物，而目前对莱茵衣藻LZTFL1蛋白的研究甚少，尚未有相应的检测抗体，因此制备 LZTFL1 多克隆抗体用于后续实验研究。[方法] 采用RT-PCR 技术从 C. reinhardtii CC125 中提取总 RNA，扩增981bp 的目的基因Lztfl1，插入到pET-28a(+)原核表达载体，成功构建pET-28a(+)-Lztfl1 重 1 组质粒，转入E.coli BL21 （DE3）经IPTG 诱导后成功表达6×His-LZTFL1 融合蛋白，融合蛋白经亲 v 1 和纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，最后采用间接ELISA 法测得抗血清效价达到1:512 000， 2 7 2 经Western blot 对 C. reinhardtii CC125 检测具有较高特异性。[结果]首次实现了莱茵衣藻LZTFL1蛋白 0 . 的原核表达，制备出一支兔抗莱茵衣藻LZTFL1蛋白的多克隆抗体，为后续研究LZTFL1蛋白在莱茵 1 1 衣藻中的结构功能及在纤毛信号传导中的相互作用奠定了基础。 7 1 关键词：莱茵衣藻；LZTFL1；蛋白纯化；多克隆抗体；免疫荧光 0 2 莱茵衣藻 （C.reinhardtii）是一种结构 病，如肾囊肿，肝脏纤维化，视网膜变性， : v i 简单的单细胞真核藻类，是目前国内外研 先天性心脏病，肥胖等都与纤毛缺陷有关， X a 究纤毛结构、组装及功能的主要模式生物 而由纤毛缺陷引起的人类疾病数量正在迅 n i [1] [2] h 之一 。纤毛根据其运动状态分为运动纤毛 速增长 。因此了解纤毛的功能、组装原理 c 和原生纤毛，运动纤毛是由“9+2”型微管 及信号通路可以为纤毛病的诊断和治疗提 蛋白骨架形成的从细胞基体部位伸出的较 供分子依据。从20 世纪90 年代以来，人 长细胞突起，原生纤毛由“9+0”型微管蛋 们对纤毛的研究逐步加深，从纤毛结构的 白骨架形成，通常所研究纤毛都为运动纤 研究到纤毛组装、功能、纤毛蛋白间的相 毛。纤毛具有协调细胞生长和进行细胞信 互作用、纤毛信号传导及纤毛与疾病间的 号传导的作用，纤毛缺失或信号传导功能 关系均取得了一定进展。已知纤毛内存在 障碍会造成一系列的疾病，目前已发现许 一种BBSome 复合物，BBSome 依赖于纤 多纤毛基因的缺失或突变导致一系列纤毛 毛内运输机制 （IFT）由IFT 蛋白携带运送 Supported by: International Center for Genetic Engineering and Biotechnology (ICGEB) Collaborative Research Program (CRP) (CRP/CHN15-01). Corresponding author: Zhen-Chuan Fan