无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化.PDFVIP

中国农学通报 2011,27(16):227-232 Chinese Agricultural Science Bulletin 无核葡萄SRAP-PCR反应体系的建立和优化 张旭彤，张朝红，肖 宇，王跃进 （西北农林科技大学园艺学院/农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室/ 旱区作物逆境生物学国家重点实验室（西北农林科技大学），陕西杨凌712100） 摘 要：以大粒无核葡萄‘皇家秋天’的基因组DNA 为模板，对无核葡萄SRAP-PCR反应体系的主要成分 及反应退火温度进行优化。获得的最优SRAP-PCR 反应程序为94℃预变性5 min ，94℃变性1 min ，38℃ 复性1 min ，72℃延伸1 min ，5 个循环；94℃变性1 min ，56℃复性1 min ，72℃延伸1 min ，35 个循环；72℃终 延伸10 min 。25 μL 体系中，模板DNA 40 ng ，Mg2+ 1.5 mmol/L ，dNTPs 0.2 mmol/L ，引物0.2 μmol/L ，Taq DNA 聚合酶0.6 U 。实验结果表明，优化后的SRAP-PCR反应体系扩增多态性高，带型清晰，稳定性好。 关键词：无核葡萄；SRAP；优化 中图分类号：S663.1 文献标志码：A 论文编号：2010-3137 OptimizationofSRAP-PCRSysteminSeedlessGrape ZhangXutong,ZhangChaohong,XiaoYu,WangYuejin (College of Horticulture, Northwest AF University, Key Laboratory of Horticultural Plant Germplasm Resources Utilization in Northwest China, State Biology in Arid Areas (Northwest AF University),YanglingShaanxi712100) Abstract: In this research, annealing temperatures and several key parameters of the seedless grape SRAP-PCRreactionsystemwereoptimized.Theresultshowedthatforseedlessgrape,themostsuitable protocolofSRAP-PCRwasinitiallydenaturingat94℃for5min,then94℃, 1min,36℃ 1min,and72℃, 1 minforthefirstfivecycles,andthentheannealingtemperaturewasraisedto53℃foranother35cycles,atlast 2+ extendingat 72℃for 10min.InthisSRAP-PCRsystem,theoptimumconcentrationsofMg ,dNTPs, Taq DNApolymerase,primersandDNAtemplatewere 1.5mmol/L,0.2mmol/L, 1.0U,0.2 μmol/L,40ng/25 μL, respectively. Keywords:seedlessgrape;SRAP;optimization 0 引言 子标记技术。该技术以双向引物扩增开放阅读框 无核葡萄因其果实中没有种子、食用方便、风味独 （ORF），正向引物扩增富含GC 的外显子，反向引物扩 特等特点，无论是在