影响骨髓间充质干细胞分离效率的若干因素的研究#.PDFVIP

中国生物工程杂志 ， ， （）： ,7I= GIK217K3KSC !8 !8 0 .8 D .E $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$ !!!!!!!!!!! ! 研究报告 ! ! !!!!!!!!!! 影响骨髓间充质干细胞分离效率的 若干因素的研究# 胡静波 蒋丹丹 周 燕 谭文松## （华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室 上海 !!#$ ） 摘要 骨髓间充质干细胞来源有限，数量稀少，极大地限制了其在组织修复、细胞治疗等方面的 应用。为了解决细胞数量限制的问题，从提高分离效率的角度对骨髓间充质干细胞的分离过程 进行了研究，考察了培养基种类、初次换液时间、起始接种密度对兔骨髓间充质干细胞分离效率 的影响。结果表明， 培养基较 、 培养基更适于兔 的分离；从骨髓中 %’ (’ (’%)* +,- ! 分离得到的单个核细胞以. / .0 1233-453 的密度接种，接种!67 后换液在短时间内得到的+,- 数目最多。采用以上分离条件，能够获得形态均一、可稳定传代 代以上仍保持旺盛增殖能力 . 的+,-，并具有向骨、脂肪分化能力。 关键词 骨髓间充质干细胞 分离效率 成骨 成脂肪 ［ ］ . 间充质干细胞（ ， ）是 通过换液去除不贴壁的杂质细胞 。本文对这一 52-217C5=3 -25 1233- +,- 一种存在于骨髓和各种间充质组织中的成体干细 分离过程的研究结果表明，培养基成分、起始接种 胞，能够在体外和体内诱导分化为骨、软骨、肌腱、 密度、初次换液时间都是影响+,- 分离的重要因 ［，］ 肌肉、神经等组织. ! ，而且可自体移植，无致瘤 素，通过对这些因素的控制可有效地提高分离到的 性、免疫排斥及伦理限制，因此在组织修复、细胞治 +,- 的数目，提高骨髓的利用率。 ［］ 疗等方面有着广阔的应用前景# 。+,- 来源十分 ! 材料与方法 广泛，目前已成功从脂肪、肝脏、小梁骨、骨髓、外周 ［ ］ 血甚至脐带血中分离得到了+,- 6 D 0 ，但对于临 ! ! #$% 的分离和培养 床应用而言，最方便快捷的来源仍是骨髓。然而 空气栓塞法处死 月龄新西兰大白兔，无菌分 . +,- 在骨髓中含量很少，体外培养过程中的扩增 离股骨和胫骨，碎骨钳剪碎后加FG+ 震荡冲出骨髓 潜能也十分有限，因此细胞数量上的限制成为实际 细胞。将冲出的骨髓悬液 .H45I 离心去除上清 ［］ 应用中的障碍# 。 及脂肪层，以FG+ 重新悬浮，缓慢铺到离心管中预先 骨髓的成分十分复杂，而