分子生物学讲座（六）.pptVIP

从基因表达的开关上分，调控可以分为二种： 正调控（positive control）：加入一种调节蛋白后，使得原来关闭的基因被开启，开始表达产物，这种属于正调控。 负调控（negative control ）：加入一种调节蛋白后，使得原来正在表达的基因被关闭，这种属于负调控。 二、操纵元概念的提出 早在20世纪初人们就发现了酵母当中的酶的诱导现象，但最清楚的还是大肠杆菌。 大肠杆菌中有一种酶即?-半乳糖苷酶。它可以把乳糖分解成葡萄糖和半乳糖二种单糖。我们知道，大肠杆菌可以利用葡萄糖、乳糖、麦芽糖、阿拉伯糖等作为碳源而生长繁殖。实验发现，当培养基中含有葡萄糖和乳糖时，细菌优先利用葡萄糖，当葡萄糖耗尽，细菌停止生长，经过短时间所以适应，就能利用乳糖，细菌继续呈指数式繁殖增长。 * * 二、多肽链合成的起始 多肽链的合成是一个比较迅速的过程。37度时，细菌合成的速度为15个氨基酸/秒。真核生物要低一些，如血红蛋白的合成速度为2个氨基酸/秒。 原核生物： 参与合成的有三种起始因子 具有加强 IF2和IF3活性作用。 9 IF1 形成30S前起始复合物 100（120） IF2 1.形成三元复合物. 2.解离因子活性，使70S核糖体颗粒解离为30S和50S亚基 23（22） IF3 功能 MW 因子 原核生物中每一个mRNA都具有其核糖体结合位点，它是位于AUG上游8-13个核苷酸处的一个短片段叫做SD序列。这段序列正好与30S小亚基中的16S rRNA3’端一部分序列互补，上述序列特征1974年由J.Shine和L.Dalgarno发现，故称为SD顺序。SD序列也叫做核糖体结合序列。 1、三元复合物(trimer complex)的形成 tRNAmetm tRNAmeti 真核 tRNAmetm tRNAmetf 原核 内部 起始 在原核和真核生物中分别有二种tRNA可以携带甲硫氨酸，识别起始密码子；另外一种是只能识别内部的甲硫氨酸。 核糖体30S小亚基附着于mRNA的起始信号部位，该结合反应是由起始因子3(IF3)介导的，另外有Mg2+的参与。故形成IF3-30S亚基-mRNA三元复合物。 在起始因子2(IF2)的作用下，甲酰蛋氨酸-起始型tRNA(fMet-tRNA Met)与mRNA分子中的起始密码子(AUG或GUG)相结合，即密码子与反密码子相互反应。同时IF3从三元复合物脱落，形成30S前起始复合物，即IF2-30S亚基-mRNA-fMet-tRNAMef复合物。此步需要能量和Mg2+参与。 2、30S前起始复合物的形成 50S亚基与上述的30S前起始复合物结合，同时IF2脱落，形成70S起始复合物，即30S亚基-mRNA-50S亚基-fMer-tRNA Met复合物。此时fMet-tRNA Met占据着50S亚基的肽酰位（P位或给位），而50S的氨基酰位（A位或受位）暂为空位。等待对应mRNA中第二个密码的相应氨基酰tRNA进入，从而进入延长阶段。 3、70S起始复合物形成 真核生物蛋白质合成的起始： 真核细胞的蛋白质合成过程基本类似于原核细胞的蛋白质合成过程。其差别除参与蛋白质生物合成的核糖体结构、大小、组成和mRNA的结构等不同外，主要区别在真核细胞蛋白质合成的起始步骤。这一步骤涉及的起始因子至少达十多种，因此起始过程更为复杂些。 （1）需要特异的起始tRNA，即tRNAmetf ， 并且不需要N端甲酰化。已发现的真核起始因子（eukaryote Initiation factor, eIF）至少有10种。 （2）起始复合物形成在mRNA5’端AUG上游的帽子结构（除某些病毒mRNA外）。 （3）ATP水解为ADP供给mRNA结合所需要的能量。 三、肽链的延长 这一过程包括进位、肽键形成、脱落和移位等四个步骤。肽链合成的延长需两种延长因子(Elongation factor，简写为EF），分别称为EF-T和EF-G。此外尚需GTP供能。 1、进位 即新的氨基酰-tRNA进入50S大亚基A位，并与mRNA分子上相应的密码子结合。此步需GTP、EF-Tu及Mg2+的参与。 2、肽键形成（转肽） 在肽酰转移酶的催化下，将P位点上的tRNA所携带的起始型的甲酰蛋氨酸转移给A位上新进入的氨基酰-tRNA，即由P位上的氨基酸提供α-COOH基，与A位上的氨基酸的α-NH2基形成肽链。此后，在P位点上的tRNA成为无负载的tRNA，而A位上的tRNA负载的是二肽酰 tRNA。 3、脱落 即50S亚基P位上无负载的tRNA脱落。 4、移位 指在EF-G和GTP的作用下，核糖体沿mRNA链相对移动。每次移动相当于一个密码子的距离，使得下一个密码子能准确的定位于A位点处。与此同时，原来处于