试验二蛋白质的颜色反应酪蛋白等电点pH的测定.PDFVIP

实验二 蛋白质的颜色反应 酪蛋白等电点pH的测定 目的： 1、学习氨基酸和蛋白质呈色反应的基本原理 和方法 2、掌握测定蛋白质等电点的方法 3 、了解蛋白质的理化性质 蛋白质的理化性质 （一）蛋白质的两性电离 （二）蛋白质的胶体性质 （三）蛋白质的变性、沉淀 （四）蛋白质的紫外吸收 （五）蛋白质的呈色反应 蛋白质的理化性质 （一）蛋白质的两性电离 蛋白质分子除两端的氨基和羧基可解离外， 氨基酸残基侧链中某些基团，在一定的溶液pH条 件下都可解离成带负电荷或正电荷的基团。 * 蛋白质的等电点( isoelectric point, pI) 当蛋白质溶液处于某一pH 时，蛋白质解离成 正、负离子的趋势相等，即成为兼性离子，净电 荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。 * 处于等电点的蛋白质溶解度最低. 当pH pI时，蛋白质带净正电荷，在电场中 向负极移动;当pH pI时，蛋白质带净负电 荷，在电场中向正极移动。 溶液的pH偏离蛋白质的pI越远，蛋白质带净 电荷越多，在电场中越容易分离。 实验操作： 一、蛋白质的两性反应 0.5% 酪蛋白溶液 0.02HCl, 0.02N NaOH （课堂使用时稀释） 酸碱指示剂：溴甲酚绿溶液 （Bromocresol green ） 分子式：C21H14Br4O5S；分子量：698.02 性质：浅黄色结晶或棕色粉末。溶于乙醇和稀碱溶液，不 溶于水。 pH变色域：3.8（黄绿）-5.4（蓝） 实验过程中观察颜色变化同时测定pH值 实验操作： 二、酪蛋白等电点的测定 “+ -” 无沉淀用“-”表示 沉淀用“+”表示 （二）蛋白质的胶体性质 蛋白质溶液是一 种亲水胶体，每 克蛋白质分子能 结合0.3 ～0.5克 水。 蛋白质属于生物大分子之一，分子量可自1万至 100万之巨，其分子的直径可达1～100nm，为胶 粒范围之内。 真溶液（1nm） 胶体溶液 悬浮液(100nm) 蛋白质的胶体特征 1.蛋白质的分子大小属于胶体质点的范围 2.蛋白质溶液稳定： （1 ）水化层：可溶性蛋白质分子表面分布着大量 极性氨基酸残基，对水有很高的亲和性，通过水 合作用在蛋白质颗粒外面形成一层水化层 （2 ）双电层：分子表面上的可解离基团，在适当 的pH条件下，都带有相同的净电荷，与其周围的 反离子构成稳定的双电层。 3. 蛋白质溶液也和一般的胶体系统一样具有丁达尔 效应、布朗运动以及不能通过半透膜等性质 水化层 + － + + 酸 碱 － － － + + 碱 酸 －