一个化学反应要产生化学发光现象.PPTVIP

1.光照发光（photoluminescence） 发光剂（荧光素）经短波长入射光照射后进入激发态，当回复至基态时发出较长波长的可见光。 2.生物发光（bioluminescence） 发生在生物体内的发光现象，如萤火虫的发光，反应底物为萤火虫荧光素，在荧光素酶的催化下，利用ATP产能，生成激发态氧化型荧光素，它在回复基态时多余的能量以光子的形式释放出来。 3.化学发光 某些物质(发光剂)在化学反应时，吸收了反应过程中所产生的化学能，使反应的产物分子或中间态分子中的电子跃迁到激发态，当电子从激发态回复到基态时，以发射光子的形式释放出能量，这一现象称为化学发光。 一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件： 在化学发光反应中参与能量转移并最终以发射光子的形式释放能量的化合物称为化学发光剂或发光底物。 作为化学发光免疫技术的化学发光剂应符合以下几个条件： 常用的化学发光剂或发光底物有 1.直接化学发光剂 2.酶促反应的发光底物 3.电化学发光剂 1.直接化学发光剂 在发光免疫分析过程中不需酶的催化作用，直接参与发光反应，它们在化学结构上有产生发光的特有基团，可直接标记抗原或抗体。如常用的吖啶酯（acridinium，AE） 。 吖啶酯在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波长 为470nm的光，具有很高的发光效率，其激发 态产物N-甲基吖啶酮是该发光反应体系的发光体。 2.酶促反应的发光底物 是利用标记酶的催化作用，使发光剂（底物）发光。 目前化学发光酶免疫技术中常用的酶有辣根过氧 化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（ALP）。HRP的常用 的发光底物为鲁米诺或其衍生物，ALP的发光底物 为金刚烷（AMPPD） （1）鲁米诺或其衍生物 鲁米诺在碱性条件下可被一些氧化剂氧化，发生化 学发光反应，辐射出最大发射波长为425nm的光。 鲁米诺增强发光反应原理 （2）AMPPD 〔3-(2‘-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3“-磷酰氧基)苯-1,2-二氧杂环丁烷〕〕 3．电化学发光剂 电化学发光剂是指通过在电极表面进行电化学反应而发光的物质。如化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+和电子供体三丙胺（TPA）在阳性电极表面可同时失去一个电子而发生氧化反应。 用化学发光剂（如吖啶酯）直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应的抗原(抗体)和磁颗粒性的抗体（抗原）发生免疫反应后，通过磁场把结合状态（沉淀部分）和游离状态的化学发光剂标记物分离开来，这时只需加入氧化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要催化剂的情况下分解、发光。由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产生的光子能，可从标准曲线上计算出待测抗原(抗体)的含量 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术，即用抗原或抗体包被磁颗粒 ，与标本中相应抗体或抗原及吖啶酯标记的抗体或 抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过在磁场 中冲洗将结合到免疫复合物中的标记物和游离标记物 进行分离的技术。 2.常用的免疫学反应模式 化学发光酶免疫分析（CLEIA）是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗体(抗原)发生免疫反应后，经洗涤将结合物与游离的酶标物分离后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。 1.根据标记酶不同分类 可分为辣根过氧化物酶标记的化学发光酶免疫分析和碱性磷酸酶标记的化学发光酶免疫分析。前者常以鲁米诺或其衍生物作为发光底物，后者常以AMPPD作为发光底物。 2. 根据免疫学反应模式分类 同化学发光免疫分析，主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法等主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是酶而不是直接标记发光剂。 电化学发光免疫分析（ECLIA）是以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗原)，通过抗原抗体反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的抗原或抗体进行定量分析，它包括电化学和化学发光两个过程。 1.分离方法 常用磁颗粒分离技术 2.免疫学反应模式 其反应模式同发光免疫分析，主要有双抗体夹心法、双抗原夹心法和固相抗原竞争法三种主要模式，所不同只是相应抗原或抗体上标记的是三联吡啶钌。 1.甲状腺激素 T3、T4、hTSH、FT4、FT3。、 抗TPO、甲状腺球蛋白、抗甲状腺球蛋白抗体等。 2.生殖激素 β-HCG、催乳素、促卵泡激素、促黄 体激素、孕酮、雌二醇、非结合雌三醇、甲胎蛋白 、睾丸酮、硫酸脱氢异雄酮。 3.肾上腺/垂体激素 皮质醇、尿皮质醇、人生长