二细菌抹片的制备及染色.PPTVIP

实验二 细菌抹片的制备及染色 一、目的要求： 1、掌握细菌抹片的制备方法 2、掌握革兰氏染色法 二、实验材料：普通光学显微镜 、香柏油、二甲苯、擦镜纸、载玻片、接种棒、酒精灯、火柴、蒸馏水、菌种（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、嗜水汽单胞菌） 实验内容 2、制片及染色步骤：取干净玻片→抹片→干燥→固定→染色→干燥镜检 细菌抹片的制备： （1）固体培养物 用经酒精灯火焰烧过的接种环，蘸取生理盐水（或者蒸馏水）1-2环于清洁无油脂的载玻片中央，再勾取细菌的固体培养物少许混于生理盐水中，涂抹成直径为1-1.5cm大小的均匀的抹片 　（2）液体培养物 可直接用灭菌接种环勾取细菌培养物，涂抹于玻片上即可。但要注意将管底沉淀物摇匀，以免影响涂片效果。 　（3）组织涂片 用灭菌的剪刀、镊子取被检组织一小块，以其断面在玻片上压印或涂抹成适当大小的薄片。如为脓汁、血液、乳汁等可直接涂抹于玻片上。 　（4）无论何种方法切忌涂片太厚，否则不利于染色和观察。 固定 （1）目的: 　a、除去抹片上的水分，使涂抹材料能很好地附着在载玻片上，以防染色过程中被水冲掉 　b、使抹片易于着色，变性的蛋白质着色力强 　c、能杀死抹片中的部分微生物 （2）方法： 　a、火焰固定 将已干燥的抹片菌膜向上，以钟摆速度在酒精灯火焰上通过数次（以不烫手背为宜） 　b、化学固定 加数滴甲醇于玻片上，固定2-3分钟，自然晾干 3、革兰氏染色法 （1）???? 草酸铵结晶紫染液1-2分钟，水洗 （2）???? 革兰氏碘液媒染1-3分钟，水洗 （3）???? 95%酒精脱色30秒-1分钟，水洗 （4）???? 沙黄水溶液复染10-30秒，水洗 （5）???? 吸干，镜检 4、使用完毕显微镜及标本片的处理 返回 作业： 1、固定的意义何在？固定时应注意什么问题？ 3、革兰氏染色的原理及关键步骤是什么？ 2、绘出你所观察到的细菌形态。 * *