关键词马立克氏病病毒糖蛋白D聚合酶链式反应够.PDFVIP

维普资讯 f7一f8 I 7 第11卷第2期 中 国 病 毒 学 V0111 No2 1996年 6月 VIR0LoGICA SINICA Jun． 1996 用PCR扩增和克隆马立克氏病病毒糖蛋 白D基因’ 段玉友 崔治 中 (扬州大学农学院动物医学系，扬州 225009) 、 殷 震 、／ (中国人民橱’’放-_军——农——牧——大—_学_，长舂I／130062) 提要 用 PCR技术，从 GA株马立克氏病病毒 (MDV)感染的成纤维细胞 (GEF)基因组 DNA 中扩 增出 MDV糖蛋白D(gD)抗原基因片段的约 1300bp编码序列，将该 PCR扩增 的产物 于 EooRl和 KpnI位点克隆到 oUC18质粒载体 中，在以 digoxigenin(dig)标记 的gDPCR产物作为探针。进行原 位杂交初步筛选到 阳性重组质粒克隆，再根据酶切 分析筛选 到含 MDVgD基 因的重组质粒 p18 MgD。将 p18MgD质粒 DNA用 d 标记后．在 Southernblot中，该探针能识别 MDV基因组 DNA 的BamH1．A克隆中的 A片段 DNA。酶切位点分析表 明，该 D克隆也和 已发表的 MDV的 RB1B 株gD一样，不含有 EcoRI、Hind~、PstI、SmaI、PvuⅡ等酶切位点。证明该重组质粒是MDVgD 克隆。 关键词马立克氏病病毒，糖蛋白D。聚合酶链式反应 够 位于病毒颗粒表面的囊膜糖蛋 白在病毒感染过程 中起着重要的作用．它与病毒识别和吸 附易感细胞、与细胞的融膜作用及病毒核酸进入细胞等感染的各种过程密切相关。疱疹病毒 是有囊膜糖蛋 白的大型病毒…，在该科中．如人的单纯疱疹病毒 (HSV)、水痘病毒 (VZV)、巨 细胞病病毒 (CMV)、淋 巴滤泡病毒 (ERV)、牛疱疹病毒 (BHV)、伪狂犬病病毒 (PRV)等的病毒 粒子糖蛋 白结构 已研究得相当深入 。如 HSV感染细胞中有 6种糖蛋 白．分别是 gB、gC、gD、 gE、gH、gl，它们分别在病毒进入细胞中发挥不同的作用L2】。对马立克 氏病病毒 (MDV)gB和 gc在感染及抗感染免疫反应中的作用 已有不少研究，例如 在感染和抗感染中和反应 中起 着重要作用 J，而 gc似乎与感染及抗感染免疫关系不密切u4，Sl。虽然 已知在疱疹病毒中，如 HSV 的gD糖蛋 白在病毒感染过程 中起最重要的作用，而且引起的中和抗体能力最强。重组 的HSVgD表达产物可引起高水平的补体依赖和补体不依赖的中和抗体，经该产物免疫 的小 鼠可被保护不受HSV的攻毒 J，但是 MDV的gD的作用还不清楚。特别令人感兴趣的是，在 MDV感染的CEF中，不能表达 gD基因_7l，这是否与 MDV在细胞培养上特有的严格细胞结 合性有关?在对 MDV基因组结构深入研究发现．MDV在基因组结构与囊膜糖蛋 白组成上更 类似 a疱疹病毒 ，它与 HSV糖蛋 白gB、gc、gD、gE、gI和 gH的同源蛋白基因均 已在 MDV 基因组 DNA酶切图上准确定位_7· l。MDVgD基因则位于 BamHI—A片段 上的 Us(短独特 区)序列中。为了进一步阐明g【)的生物学特性．根据最近发表的MDVgD基因完整序列_I， 本文于 1995年