含淀粉质废弃物生产柠檬酸之研究.DOC

含澱粉質廢棄物生產檸檬酸之研究 Study on Citric Acid Production from Starch and Agro-industrial Wastes 研究生：蘇妲琳Sudarin Rodmanee 指導教授：鄧德豐 Der-Feng Teng 【摘要】 利用Aspergillus niger菌株使碳水化合物發酵後，其主要產物為檸檬酸。在工業上選擇使用的基質為糖蜜和澱粉。農業上可再生利用的澱粉基質能被當作在檸檬酸發酵的原料。 本研究之目的是在分離和篩選能夠生產檸檬酸的A. niger及酵母菌，研究影響檸檬酸生產的重要因子，如使用Candida tropicalis Y-52批式培養時對檸檬酸發酵的影響和最適生產條件，並且比較使用單一培養(A. niger No.4)和混合培養(A. niger No.4和C. tropicalis Y-52)在半固態和固態發酵澱粉之檸檬酸產量。 從自然界分離出96株產酸酵母菌。從中篩選出檸檬酸產量高的酵母菌C. tropicalis Y-52並且加以鑑定。以振盪培養檢討合成培養基和培養條件對檸檬酸生產之影響。最適培養基和培養條件則以30% (w/v)葡萄糖、0.2%氯化銨、0.02%磷酸二氫鉀、0.005%硫酸鐵、0.005%硫酸鎂、0.025%硫胺素、起始pH5.5在30℃下培養3天，結果顯示可滴定酸度可增加達14.41% 和理論收率為45.03%。 篩選出具有利用糊化馬鈴薯澱粉能力的6株A. niger(No.1, 2, 3, 4, 5, 6)檸檬酸生產菌，當培養在含有1%馬鈴薯澱粉及使用小麥麩皮作為擔體的固態培養時，篩選出來的A. niger No.4可產生1.89%可滴定酸度。 檢討利用單一培養(A. niger No.4)和混合培養(A. niger No.4和C. tropicalis Y-52)在半固態和固態發酵從糊化馬鈴薯澱粉之檸檬酸生產。 在最適參數之中，利用單一培養(A. niger No.4)和混合培養(A. niger No.4和C. tropicalis Y-52)以半固態發酵生產檸檬酸，顯示在20% (w/v) 馬鈴薯澱粉可穫得最大的可滴定酸度值22% 和檸檬酸的理論收率93.74%。接種5% A. niger No.4、在pH5、溫度30℃下、振盪速度150rpm、培養24小時後再接入10%接種量的C. tropicalis Y-52在，添加4%甲醇到基質中，發酵6天行使檸檬酸的理論收率從57.45%增加到93.74%。 檸檬酸生產也使用固態發酵。利用混合培養以馬鈴薯澱粉固態發酵生產檸檬酸時顯示一些重要結果。利用小麥麩皮和甘蔗渣(4：1)為擔體，發酵澱粉的最適條件:15% (w/v)澱粉、60%水分、接入5%接種量的A. niger No.4在pH4.5、30℃下培養12小時後再接入10%接種量的C. tropicalis Y-52，添加4%甲醇時，結果有顯著增加檸檬酸產量，在發酵5天有最大理論收率之134.63%。 證明固態發酵的檸檬酸生產系統比半固態發酵好。固態發酵斷定為可有效應用在A. niger No.4和C. tropicalis Y-52混合培養上以直接以澱粉發酵生產檸檬酸，並且可使整個製程更經濟在基質成本和發酵技術也可以發展成為檸檬酸發酵的新方法。 關鍵字：檸檬酸、Aspergillus niger 、Candida tropicalis、澱粉 【Abstract】 Citric acid has been mainly produced through fermentation of carbohydrate by strains of Aspergillus niger. Molasses and starchy materials were found to be the substrates of choice used in industrial scale. Starch is a renewable agricultural substrate available and could be used as potential raw material for citric acid fermentation. This study was to isolate and select strains of yeast and A. niger that are capable of producing citric acid, to elucidate important factors influencing citric acid formation in batch culture