树鼩副粘病毒TPMVPCR方法的建立及初步应用王淑菁付瑞李晓波.DOCVIP

树鼩副粘病毒（TPMV）PCR方法的建立及初步应用 王淑菁 付瑞 李晓波 王吉 贺争鸣 岳秉飞 中国食品药品检定研究院实验动物资源研究所，国家实验动物质量检测中心， 北京100050 [摘要]目的 建立树鼩副粘病毒（Tupaia paramyxovirus，TPMV请补充英文全称已补充）PCR检测方法，并进行初步应用。方法 根据NCBI公布的TPMV基因组序列，选择8231-8720区域人工合成一段DNA序列并转入质粒中，作为阳性标准质粒。根据TPMV保守区域设计1对特异性引物，考察方法的特异性和灵敏度，并应用于60份树鼩呼吸道咽拭子cDNA及12份树鼩肺组织cDNA的检测中。结果 所建立的PCR检测方法特异性好，灵敏度高，可达11.5 x10-5μug/mL。60份树鼩呼吸道咽拭子cDNA及12份树鼩肺组织cDNA检测均为阴性。结论 建立的树鼩副粘病毒PCR检测方法特异性强，灵敏度高，可用于树鼩副粘病毒的常规检测中。 请补充英文全称 已补充 【关键词】树鼩；副粘病毒；PCR；检测 Establishment and application of a PCR method for detection of the Tupaia (tree shrew) paramyxovirus (TPMV) WANG Shu-jing，FU Rui， Li Xiao-bo，Wang Ji，He Zheng-ming，Yue Bing-fei （National Institute for Food and Drug Control，Institute for Laboratory Animal Resources, National Center for Monitoring of Laboratory Animal Health, Beijing 10050，China） [Abstract] Objective To establish and preliminarily apply the effective PCR assay for detection of the Tupaia (tree shrew) paramyxovirus (TPMV). Methods According to NCBI Genbank, TPMV genome DNA from 8231 to 8720 were synthetic and inserted into a plasmid as positive standards. One pair of primers were designed based on this sequence. 60 respiratory swabs and 12 lung tissues from tree shrew were tested with this PCR assay. Results A PCR method for detection of TPMV is successfully established, with a high specificity and the sensitivity was 11.5 x10-5μug/mL. The PCR results of testing 60 respiratory swabs and 12 lung tissues were negative. Conclusions The PCR for detecting TPMV, which have good specificity and high sensitivity, can be used in conventional tree shrew paramyxovirus detection. 【Key words】Tupaia (tree shrew)； Paramyxovirus；PCR；Detection _______________________________________ [作者]王淑菁(1985-)，女，助理研究员，研究方向：实验动物病毒学。Email: wsj2008gogo@163.com [通讯作者]岳秉飞(1960-)，男，博士，研究员，研究方向：实验动物质量控制。Email：y6784@126.com 目前树鼩作为一种新型实验动物资源，在肝炎病毒[1]、EV71病毒[2]、流感病毒[3]等人类病毒研究中应用广泛。树鼩作为实验动物，比犬、鼠等更适合于人类相关疾病的研究[4]。除此以外，从树鼩中分离得到的树鼩副粘病毒，作为一种新型的溶瘤病毒载体日益受到关注[5]。将树鼩副粘病毒进行基因改造后成为溶瘤病毒载体，运用于靶向治疗研究中。