黄色型和白色型金针菇色素合成途径中相关酶活的测定.DOCVIP

PAGE \* MERGEFORMAT II PAGE \* MERGEFORMAT II 硕士学位论文 金针菇颜色突变型的遗传属性研究 学 科 专 业 植物学 学 位 类 型 ?科学学位 ?专业学位 研 究 生 姓 名 刘丽娜 导师姓名、职称 张平 副教授 论 文 编 号 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一六 年三月  分 类 号 密级 学校代码 10542 学号 201302141116 金针菇颜色突变型的遗传属性研究 Study on genetic property of the color mutant of Flammulina velutipes 研 究 生 姓 名 刘丽娜 指导教师姓名、职称 张平 副教授 学 科 专 业 植物学 研 究 方 向 应用真菌 湖南师范大学学位评定委员会办公室 二零一六 年三月 PAGE \* MERGEFORMAT II PAGE \* MERGEFORMAT II PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT III PAGE \* MERGEFORMAT II PAGE \* MERGEFORMAT II PAGE \* MERGEFORMAT PAGE \* MERGEFORMAT I 摘 要 金针菇Flammulina velutipes，又称冬菇、朴菇、构菌、毛柄小火焰菌，是担子菌门(Basidiomycota)、伞菌纲(Agaricomycetes)、伞菌目(Agaricales)、膨瑚菌科(Physalacriaceae)、小火焰菌属(Flammulina)的一种真菌，为著名的食用菌。自然状态下的野生金针菇子实体为黄褐色，目前商业栽培的金针菇有纯白色型和黄色型两个品系，纯白色金针菇为突变型。虽然子实体颜色是重要的商业品质之一，有关金针菇色素的成分和色素合成途径以及白色突变型产生的机理还罕有研究。本论文在对黄色型金针菇的色素进行提取、鉴定的基础上，比较了黄色金针菇和白色金针菇色素合成关键酶活性差异，并以第二代高通量测序为平台对黄色型金针菇和白色型金针菇进行了转录组测序。主要研究结果如下： （1）利用色素具有酸沉碱溶的性质，对黄色型金针菇的色素进行提取。并通过紫外-可见光谱扫描结合红外光谱扫描，最后确定金针菇的色素属于3,4-二羟基苯丙氨酸（DOPA）类黑色素； （2）黄色型金针菇的超氧化物歧化酶（SOD）活性要明显低于白色型，但其酪氨酸酶的酶活要明显高于白色突变型； （3）通过高通量测序，总共产出967348960nt数据。组装结果获得总Unigene 29490个，总t,平均长度1404nt。Unigene功能注释，注释到数据库NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、GO的Unigene分别是21247个、6985个、13260个、13234个、10062个、7310个，所有注释上的Unigene是31397个。预测编码蛋白框（CDS），比对到蛋白库的CDS有21239个，预测出的CDS有2244个，共23483个，SSR共1442个； （4）结合Unigene表达差异分析和KEGG代谢通路分析，得出金针菇黑色素合成途径中起关键作用的是酪氨酸酶基因，并得出在黄色型金针菇中起关键上调作用的酪氨酸酶基因的编码为CL520 contig1，CL1942 contig2，CL1942 contig3 和 CL1942 contig4； （5）通过荧光定量PCR结合半定量RT-PCR技术，证实了黄色型金针菇和白色型金针菇之间酪氨酸酶基因表达的差异。结果与转录组测序分析得到的结果一致。 关键字：金针菇，黑色素，酪氨酸酶，转录组，荧光定量PCR ABSTRACT Flammulina velutipes, also known as snake butter, is a fungus belonging to Flammulina, Physalacriaceae, Agaricales, Agaricomycetes, Basidiomycota. It is a famous edible fungus. The fruiting body of wild Flammulina velutipes in its na