现代生物学实验上册 林加涵等主编.pdf

第一篇　　生物显微实验技术 第 一 章 各 种 光 学 显 微 镜 及 电子显微镜在生物学 中的应用 显微镜发明 多年来，通过不断地改进，它的装置和性能都得到不断改善，并且出现了适应 于不同需要的各种特殊显微镜。如能观察活细胞的相差显微镜；既能作形态观察，又能作定性分析 的荧光显微镜；作为定量研究的干涉显微镜；用于双折射研究的偏光显微镜；根据量子力学中的隧 道效应设计而成，迅速提高生物大分子、超导材料及表面科学等领域研究水平的扫描隧道显微镜； 世纪 年代发展起来 的新一代科技产 品，现代形态学、细胞分子生物学、遗传 学、神经科学、药 理学、材料学及地质学等领域中强有力的研究工具之一 激光扫描共聚焦显微镜等等 。光学显 微镜技术虽然是经典的技术，然而它还在不断发展之中，所 以迄今仍是研究生物学和其他科学的重 要手段 。 光学显微镜分辨率 由于受照明光线波长 的限制，理论上其最小分辨距离为 ，实际上能 清晰看到的最小物体直径约为 大小。而 电子束 的波长很短，电子显微镜最小分辨距离可 达到 ），相 当于 原子 的大 小 。所 以，自从 年世界上第一架 电子显微镜 问世之后 ，大 大促进 了生物的微观世界研究水平的提高。除了透射电镜之外，还发展了扫描 电镜、高压电镜以及 很 多 的衍生技术 ，如负染技术、胶体金免疫标记技 术、大分子（核酸 ）电镜技术、复型和冷冻蚀刻技 术、电镜放射 自显影技术及 电镜酶细胞化学技术等。这就推进 了对细胞超微结构和分子结构的研 究 。 本章择要介绍各种光学显微镜和 电镜技术的基本原理及其在生物学中的应用。 实验一　　普通光学显微镜的使用 （一） 细胞形态 结构 的观察 一、实验原理 细胞是生物体的基本结构单位 。构成生物机体 的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首 先要从其形态结构入手。众所周知，细胞很小，绝大多数的细胞人们的肉眼无法辨认 。所 以，要借 助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，特别是在 电镜下才能观察到细胞的基本形态结构。 显微镜为什么能把微小的细胞或物体放大呢？在普通物理学 中已经详细地谈到透镜成像的原 理 。这个原理也就是显微镜的光学原理。显微镜之所 以能将被检物体进行放大，是通过透镜来实 现的。虽然物镜和 目镜的结构很复杂，但它们的作用都相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如 图 所示。被检物 放在物镜（ ）下方 的 倍焦距之 间，则在物镜（ ）后方形成一个倒 立的放大实像 ，这个实像正好位于 目镜（ ）的下焦点之内，通过 目镜后形成一个放大的虚像 ，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛明视距离处，即 ，使所看到 的物体最清晰，也就是说 虚像　 是在眼球晶状体的两倍焦距之处，在眼球后在视网膜形成一个倒立的 缩小像 图 光学显微镜 的放大原理和光路图 被检物体（ ）正好在物镜（ ）的前焦面（ ）之 外 倍 焦距 之 间 ），中间像 ）则 正好在 目镜（ ）的焦 面（ ）之 内，并形 成 正立 放 大 虚 像（ ）在 眼球 ）的两 倍 焦 距（ ）之外，最终在视网膜上形成正实像 显微镜 的照 明原理：以透射光作为入射光 ，显微镜有两种照 明方式，如 图 所示 。一种为临 界照明，光源经扣光镜后会聚在被检物体上，光束狭而强，这是它的优点。但是光源的灯丝像与被 检物体的平面重合，这样就造成被检物体的照明呈现出不均匀性，在有灯丝的部分则明亮，无灯丝 的部分则暗淡，不仅影响成像的质量，更不适于显微照相。另一种为柯拉（ ）照 明 ，照 明光 路 中的光学组件包括光源、集光器、视场光栏