硕士研究生课-生物化学与分子生物学.PPT

关于mRNA分子的剪接 过去人们一直认为，基因的遗传密码子连续不断地并列在一起，形成一条没有间隔的完整的基因体。 结构分析发现，在真核蛋白质编码基因的核苷酸序列中间插入有与氨基酸编码无关的DNA间隔区，使一个基因的编码区被分隔成若干个不连续的区段。 编码序列不连续的基因被称为断裂基因。断裂基因编码区中的不编码区段被称为内含子，而各个编码区段则被称为外显子。 通常，有内含子的基因首先转录成mRNA 前体，之后内含子被剪除，与此同时各个外显子依次被拼接在一起。成熟的mRNA只含有如下三部分：1）外显子序列，2）5’转录非翻译区，3）3’转录非翻译区。 mRNA前体分子中内含子的删除过程就是mRNA分子的剪接。 mRNA剪接三阶段 两条重要信息： 首次发现RNA选择性剪接现象：1980年， Baltimore在研究小鼠IgM 基因表达时，发现不同的外显子组合可以分别产生膜型和分泌型IgM。 研究显示，约35%－60%的人类基因在mRNA剪接时有选择性。 主要相关技术： RT-PCR 琼脂糖电泳 基因组DNA测序 cDNA测序 RNA酶保护分析 生物信息学比对 mRNA选择性剪接的类型 内含子5’端剪切位点右移（right shift），导致外显子增长。 内含子5’端剪切位点左移（left shift），导致外显子缩短。 内含子3’端剪切位点右移（right shift），导致外显子缩短。 内含子3’端剪切位点左移（left shift），导致外显子增长。 内含子保留。 外显子切除。 ……………。 …………。 mRNA选择性剪接的主要生物学意义： mRNA选择性剪接是基因表达调控重要机制之一。 mRNA选择性剪接是产生蛋白质组多样性的重要机制。 mRNA选择性剪接使成熟mRNA更具多样性，因此扩大了蛋白质生物合成模板的数量，同时也使得同源蛋白质的表现型更丰富，增加了彼此间互为制约因素这一新的重要环节。 mRNA选择性剪接是物种进化的重要方式之一。 * mRNA分子选择性剪接 Alternative splicing of mRNA molecule 核酸实验研究技术进展－3 核酸实验研究技术进展－3 transcription and past-transcribed modification for albumin gene A B C D E F G L 1 2 3 4 5 6 7 5’ 47 185 51 129 118 143 156 1043 gene-7.7kb 5’ hnRNA transcription AAA AAA m7G5’ppp5’ m2’G 5’ modification modified mRNA AAA AAA 5’ lariat mRNA to form lariat m7G5’ppp5’ m2’G AAA AAA 5’ mature mRNA splicing m7G5’ppp5’ m2’G 核酸实验研究技术进展－3 外显子与内含子之间剪切位点的特异性 核酸实验研究技术进展－3 内含子两端剪切点序列具有高度一致性，即GT……AG或GU……AG；因此也曾有人把内含子定义成一段从双核苷酸GT(GU)开始到双核苷酸AG结束的特殊的核苷酸序列，通常把这一规律称为GT-AG法则或GU-AG法则。 内含子两端剪切点左右毗邻序列的一致性并不高。 GT(GU)-AG法则对许多真核生物核基因是适用的，然而有例外情况。 GT(GU)-AG法则并不适用于线粒体DNA编码基因内含子，同时也不适用于酵母tRNA基因内含子。 核酸实验研究技术进展－3 Intergenic Intergenic Gene Exon1 Intron1 Exon3 Exon2 Intron2 pre-mRNA GU AG AG GU Exon Exon Exon Splicing to mature mRNA 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ Donor Site Acceptor Site U1 U2 Genome: Transcriptome: Process of mRNA Splicing 核酸实验研究技术进展－3 mRNA剪接套索结构电子显微镜照片 哺乳动物mRNA剪接体电子显微镜照片 25nm×50nm颗粒状态，可能由一些被刚性结构连接着的分立的区域构成，包括U1、U2、U4、U5、U6snRNA和一些蛋白质。 核酸实验研究技术进展－3 AG……. UCCAUACAUAPP