葡萄球菌肠毒素的纯化研究总结.pptVIP

葡萄球菌肠毒素C的纯化研究 主讲人 鲍行豪 研究人员:鲍行豪 夏占强 蓝明玉 一、培养基及培养条件的优选 二、用分子截留方法浓缩肠毒素原液 三、用DEAE-纤维素（系Pharmacia 产品）柱层析作第一步提取 四、用Sephadex G-75分子筛层析柱进一 步纯化 五、纯化前后SET-C的SDS鉴定 六、纯化后的SET-C分子量测定 七、对SET-C纯化品的N末端氨基酸测定 前言 为了检测“金葡素”制剂中有效成份葡萄球菌肠毒素C(SET-C),我们对提纯SET-C方法进行了较为系统的研究。经多次试验，认为按四部法提取SET-C能获得较好效果，并对SET-C的某些生物学特性作了探索。现总结如下： 一、培养基及培养条件的优选 我们比较了猪心胨汤（原生产“金葡素”用培养基）、酶解猪心汤和胰酪胨综合培养基，接种复壮后种子液，以静置与摇瓶（156r/min）二种方式作48小时培养，取出以高速离心法除去菌细胞，再用0.45um微孔滤膜过滤除去残存菌，取其无菌滤液用反相胶乳凝集试验（RPLA）测SET-C含量。 结果证明：胰酪胨综合培养以摇瓶培养金黄色葡萄球菌，其产生SET-C最高。因此，我们在作SET-C提纯时就决定采用胰酪胨综合培养基及摇瓶培养方式来制备肠毒素原液。 二、