生物化学-RNA的生物合成和加工.pptVIP

转录后加工 第三节 几种主要的修饰方式 1. 拼接(splicing) 2. 剪切(cleavage) 3. 修饰(modification) 4. 添加(addition) tRNA和rRNA被加工的证据 rRNA和tRNA有以下三点特性： 1） 所有RNA初级转录产物的5`末端均是5`-三磷酸，而成熟rRNA和tRNA分子的5`末端是5`单磷酸； 2）rRNA和tRNA分子比初级转录产物小很多； 3）所有tRNA含有稀有碱基。 （一）rRNA的加工 原核生物rRNA转录初始物: rRNA基因和tRNA基因组成混合操纵子： 16SrDNA 23SrDNA 5SrDNA tDNA 加工 RNA酶Ⅲ对转录初始物切割 再加工成熟 原核生物的转录后加工 原核生物有7个rRNA转录单位 RNaseⅢ RNaseⅢ RNaseE 甲基化碱基 甲基化核糖 (二)tRNA的加工大肠杆菌染色体有tRNA基因约60个 原核生物tRNA转录初始物: tRNA基因: ◆Ⅰ型--- tRNA 有 3’-CCA-OH ◆Ⅱ型--- tRNA 无 3’-CCA-OH tRNA转录初始物: ◆与rRNA相连 ◆几个相同(不同)tRNA连在一起 多顺反子转录单位 ●加工 RNA酶Ⅲ RNA酶F RNA酶D RNA酶P tRNA核苷转移酶 切开rDNA、tDNA转录产物 间隔序列 从3’端切断前体分子 核酸外切酶,切除Ⅰ型tRNA 3’-CCA-OH下游序列 （核酸+蛋白） （M1RNA） 内切酶，tRNA5’端成熟酶 催化Ⅱ型tRNA形成稳定的3’-CCA-OH “斩头”，去尾，剪接，3’-末端添加，化学修饰 原核生物tRNA前体分子的加工 b、末端添加：3’-端添加CCA序列。 c、修饰：形成稀有碱基如DH2 。 RNAaseP RNAaseF RNAaseP RNAaseF RNAaseD RNAaseD ACC ? ? ? 表示核酸内切酶的作用 表示核苷酸转移酶的作用 表示核酸外切酶的作用 表示异构化酶的作用 （三） mRNA的加工 原核细胞的mRNA通常没有转录后的加工过程。 真核生物的转录后加工 大肠杆菌RNA聚合酶的作用 起始阶段：在DNA分子上搜索启动子，并将 DNA双螺旋解开一小段。 延伸阶段：选择正确的核苷三磷酸（NTP），催化磷酸二酯键的形成。 终止阶段：检测RNA 合成的终止信号，停止RNA的合成。 特点：不需引物；无核酸外切酶活性。 错误率高：1/104~105核苷酸,是DNA复制的105倍。 （一）转录起始 转录起始需解决两个问题： RNA聚合酶必须准确地结合在转录模板的起始区域。 DNA双链解开，使其中的一条链作为转录的模板。 一、原核生物的转录过程 RNA聚合酶全酶在转录起始区的结合 2. DNA双链解开，约解开17个碱基对。（酶与启动子结合的部位是AT富集区，有利于解链）? 1. RNA聚合酶全酶(?2????)与模板结合 5?-pppG -OH + NTP ? 5?-pppGpN - OH 3? + ppi 转录起始过程 3.第一个核苷三磷酸(常常是GTP或ATP)结合到全酶上，形成“启动子-全酶-核苷三磷酸”三元起始复合物。 4.第二个核苷酸参入，连结到第一个核苷酸的3羟基上，形成了第一个磷酸二酯键。 ??因子从全酶上掉下，又去结合其它的核心酶。 RNApol (?2????) - DNA - pppGpN- OH 3? 转录起始复合物: （二）转录延长 1. ?亚基脱落，RNA–pol聚合酶核心酶变构，与模板结合松弛，沿着DNA模板前移； 2. 在核心酶作用下，NTP不断聚合，RNA链不断沿5→3方向延长。 (NMP) n + NTP ?? (NMP) n+1 + PPi DNA上的解螺旋区：在RNA链延伸的同时，RNA聚合酶继续解开它前方的DNA双螺旋，暴露出新的模板链，而后面被解开的两条DNA单链又重新形成双螺旋，DNA上的解螺旋区保持约17个碱基对的长度。 转录空泡(transcription bubble)： RNA-pol （核心酶） ···· DNA ···· RNA RNA链的延伸图解 3′ 5′ RNA-DNA杂交螺旋 聚合酶的移动方向 新生RNA 复链 解链 编码链 模板链 延长部位 RNA-DNA杂交区：刚合成出来的RNA链与解开的DNA模板链之间可形成一小段RNA-DNA杂交区。随着核心酶的移动，RNA链不断地延伸，杂交区也往前延伸，但后面的杂交区随着DNA双螺旋的恢复，RNA链逐渐被置换出来，因此，杂交区也保持着固定一小段。 5? 3