孕前遗传学实验室流程和临床意义.ppt

孕前遗传学实验室流程和临床意义; 医学遗传学实验围绕人外周血染色体制备、SCE观察分析、性状调查及皮纹分析等方面的工作，在掌握基本的实验方法及技能同时引导学生制定实验路线。在实验中有意识地培养同学们规范操作、仔细观察和收集数据、科学的归纳分析等严谨、实事求是的科学素养。;人外周血淋巴细胞染色体标本制备;实验目的 实验原理 实验试剂与仪器 实验步骤 注意事项 结果分析 作业及思考题;了解人类外周血淋巴细胞的培养方法。 熟悉人类染色体的基本形态特点。 掌握染色体标本的制备方法。;二、实验原理 ;这种培养方法是Moorhead于1960年建立的。 在人类遗传分析中普遍采用外周血培养的方法获取分裂的细胞，进而开展临床和基础遗传学的研究。 这对于遗传疾病的检出以及遗传咨询等工作发挥了重要作用。 ;抽滤器、恒温水浴箱、离心机 培养瓶、注射器、移液管、量筒 RPMI1640、小牛血清、NaHCO3、生理盐水、肝素、1.0g/L秋水仙素溶液、低渗液（0.025M KCl）、固定液;1. 植物血凝素 (PHA ) 刺激外周血淋巴细胞从G0期返回正常细胞周期。 2. 秋水仙素 阻止微管组装。 ①中期染色体无法排列赤道板。 ②抑制姐妹染色体的分离，将细胞停留在中期。 目的 : 获得大量的中期细胞。 ;3. 固定剂 新配置的甲醇 冰醋酸混合液 (3:1)。 4. 染料 Giemsa。;四、实验步骤 ;取样;离心 （同前）;空 气干燥;吹干;1) 离心机平衡： 离心管的重量平衡； 离心管偶数、对称放置 2) 细心、温柔混匀沉淀； 3) 冰、湿玻片； 4) 确定将材料滴在玻片上； 5) 不能烘烤!!!;六、结果分析 ;人中期细胞染色体（2N=46） ;七、作业及思考题;核型分析及SCE观察;实验目的 实验原理 实验材料 实验步骤 注意事项 作业与讨论; 一、实验目的;二、实验原理;在DNA复制过程中，加入外源的5-溴脱氧尿苷(BrdU)使DNA双链的化学组成形成差别，经过分化染色处理，导致2条姐妹染色单体呈现深浅不同的色差。;染色体的特征;应用意义;人类23对染色体;三、试验材料;组型分析实验方法;分组排队原则;四、实验步骤;五、注意事项;结果分析;作业与讨论;人类某些遗传??状调查; 人类单基因遗传的性状或疾病在上下代之间的传递遵循孟德尔定律，在一个大的群体中，通过调查分析这些性状，可以对该群体的某一基因频率及基因型频率做出估计；另外某些性状在临床诊断上可以做为遗传病的诊断参考。; 较为常见的单基因遗传性状有：苯硫脲（phenylthiocarbamide，PTC）尝味、ABO血型、眼睑的单与双、耳垂的有或无、能卷舌和不能卷舌及额前发际的形状等，均属于单基因控制的性状。;一、PTC尝味实验; PTC是一种白色结晶状药物，由于其含有N－C=S基团而有苦涩味，但对人无毒副作用；不同种族、民族和个体之间，对该物质的尝味能考不同；人体对苯硫脲的尝味能力是由一对等位基因(Tt)所控制的性状，T对t为不完全显性。;3．实验内容;①让受试者坐在椅子上，仰头张嘴，用滴管滴5～10滴14号液于舌根部，让受试者徐徐下咽品味，并用蒸馏水作对照试验。;③tt基因型的阈值范围为1～6号液，Tt基因型的阈值范围为7～10号液，TT基因型的阈值范围为11～14号液。为简化操作程序，也可只用6，7，10，11和13号五种溶液进行测试，尝不出6号苦味者为tt基因型，尝出7号和10号液的苦味者为Tt基因型，尝出11号者为TT基因型。;; 人类对PTC尝味能力属于不完全显性遗传(半显性遗传),而且已知纯合体味盲（tt）容易患结节性甲状腺肿，因此可以把PTC的尝味能力，作为一种辅助性诊断指标。我国汉族人群中，PTC味盲约占10％。;二 、 ABO血型检测;2．实验原理; 一种血液中红细胞在A型标准血清中发生凝集者为B型，在B型标准血清中凝集者为A型，在两种标准血清中都凝集者为AB型，在两种标准血清中都不凝集者为O型。;3．实验内容;(2)操作步骤;③在玻片的每一凹格(或方格)内分别滴一滴制好的红细胞悬液(注意滴管不要触及标准血清)，然后立即用牙签或小玻棒分别搅拌液体，使血球和标准血清充分混匀。;④在室温下每隔数分钟轻轻晃动玻片几次，以加速凝集，等10～30 min后观察有无凝集现象。若混匀的血清由混浊变为透明，出现大小不等的红色颗粒，表示红细胞已凝集。若仍呈混浊状，无颗粒出现，则表明无凝集现象；若观察不清可用显微镜在低倍镜下观察；若室温过高，可将玻片放于加有湿棉花的培养皿中，以防干涸；室温过低可将玻片置于37℃恒温箱中，以促其凝集。;表一 ABO血型的凝集反应和基因型;⑤根据ABO血型