生物化学-RNA的生物合成.ppt

第四节 原核生物RNA的合成 原核生物的启动子序列 研究方法：RNA-pol保护法 分离基因 加入提纯的RNA-pol 加入核酸外切酶 保护区碱基序列组成分析 -35区是RNA-pol对转录起始的辨认位点 -10区主要供RNA-pol结合。 一、原核生物RNA合成的起始 转录起始是指RNA-pol辨认、结合启动子,并前移形成第一个3′，5′-磷酸二酯键的过程 转录起始复合物 二、原核生物RNA合成的延长阶段 σ因子与核心酶脱离，核心酶沿模板链向前移动RNA链不断延长。 三、原核生物RNA合成的终止阶段 转录的终止—RNA聚合酶在DNA模板上停顿下来，转录产物RNA链从转录复合物上脱落下来。 转录终止的两种机制： 非依赖ρ因子的转录终止 依赖ρ因子的转录终止 1. ρ因子依赖性的转录终止 ρ因子的功能：能与转录产物RNA结合;具有ATP酶和解螺旋酶活性 2. ρ因子不依赖性的转录终止 RNA分子中产生的茎环结构使RNA聚合酶变构，转录停顿；使转录复合物趋于解离，RNA产物释放。 四、原核生物RNA的加工 （一）原核mRNA不需加工 原核生物mRNA合成与翻译同时进行 原核生物翻译不需加工修饰 （二）原核生物rRNA转录后的加工 （三）原核tRNA的加工 切除多余的序列（内切酶）并连接（连接酶） 个别碱基甲基化（tRNA甲基转移酶） 核苷内的转位反应（假尿苷生成） 脱氨反应（A转变为I） 还原反应（双氢尿嘧啶的生成） 第五节 RNA的复制 RNA的复制：以进入宿主细胞的病毒RNA为模板，在RNA复制酶的催化下合成病毒RNA的过程。 （一） RNA复制酶 １. RNA复制酶的发现 1963年在噬菌体Qβ（RNA噬菌体）中发现RNA复制酶。该酶只识别病毒自身的RNA，而对宿主及其他病毒的RNA无作用。 ２.噬菌体QβRNA-单链RNA 4.5Kb A2蛋白 基因 外壳蛋白 基因 复制酶β亚基 基因 A1蛋白 基因 3.Qβ复制酶： β亚基 α亚基 γ亚基 δ亚基 由噬菌体Qβ编码， 分子量65KD， 有催化作用，35个核苷酸/秒 核糖体蛋白S1， 分子量65KD。 与噬菌体QβRNA结合 延长因子EF-Tu, 分子量45KD， 识别模板并选择结合底物NTP 延长因子EF-Ts, 分子量35KD， 稳定α亚基和γ亚基的结构。 来自宿主细胞 (二)RNA复制过程 1.单链正链RNA的复制 2.单链负链RNA的复制 3.双链的RNA的复制 1.单链正链RNA复制 （噬菌体Qβ 、脊髓灰质炎病毒、SARS病毒） 转录与复制的区别 项目 转录 复制 模板 DNA（模板链转录，转录不对称） DNA（双链同时复制） 底物 四种核糖核苷酸（ATP、GTP、CTP、UTP） 四种脱氧核糖核苷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP） 酶 RNA聚合酶（无校读功能） DNA聚合酶（大多有校读功能） 引物 不需要 需要RNA引物 碱基配对 A-U A - T 产物 单链RNA 双链DNA 问题： 你能总结出转录与复制的区别吗？ 历史故事 一.断裂基因的发现 1977年，在寒春港会议上，来自寒春港实验室的罗伯茨（Richarl J.Roberts）和麻省理工学院癌症研究中心的夏普（Pilip A. sharp）报道了他们关于真核生物断裂基因的发现。因为这一发现，他们分享了1993年诺贝尔生理医学奖 第十二章 RNA的生物合成 第一节 RNA聚合酶及RNA转录的一般特点 转录体系的组分 模板 DNA（只基因中的一条链转录） 底物 ATP、GTP、CTP、UTP 酶 RNA聚合酶催化3′，5′-磷酸二酯键生成（RNA聚合酶不需引物、无较读功能） 金属离子 Mg2+、Mn2+ 转录因子（真核） 参与转录启动 终止蛋白（ρ因子 （原核） 参与转录终止 RNA聚合酶 真核生物RNA聚合酶的种类及性质 种类 Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型 线粒体型（Mt型） 分子量 5.5×105 6×105 6×105 （6.4~6.8）×105 分布 核仁 核质 核质 线粒体 产物 rRNA前体（5.8S、18S、28S） mRNA前体 tRNA前体 5s rRNA snRNA 线粒体RNA 对利福平的敏感性 不敏感 不敏感 不敏感 敏感 对鹅膏蕈碱的敏感性 （二环八肽） 不敏感 非常敏感 敏感 不敏感 原核生物RNA聚合酶 E.coli的RNA聚合酶是由四种亚基组成的六聚体 （?2?????） 原核生物RNA聚合酶各亚基的功能 亚基 分子量 功能 α 36512 控制转录的速率 β 150618 具有起始和催化作用 β′ 155613 兼