响应面法优化少根根霉发酵合成富马酸-食品与发酵工业.PDF

响应面法优化少根根霉发酵合成富马酸。 刘 宁1，张 昆1，何 皓1，李 霜1，嵇松扬2，黄 和1 1(南京工业大学制药与生命科学学院，江苏南京，210009)2(北京盈信阳光生物技术有限公司，北京，100086) 摘 要 利用少根根霉发酵生产富马酸，考察了不同浓度的初始葡萄糖以及有机氮源酵母膏和无机氮源 (NHt)zS04对富马酸的合成的影响。在此基础上运用响应曲面分析方法优化了富马酸产量以及转化率，葡萄 度为121．29／L、2．239／L时，富马酸的转化率最大为55．16％，在原来基础上产量有了明显的提高，优化效果较 好，通过验证实验值与预测值基本相符。 关键词 富马酸，优化，少根根霉，响应凿面 富马酸(fumaricacid)是一种重要的大宗化学 出发菌株：少根根霉(Rhizopus 品，可广泛应用于食品、化工、医药、涂料、树脂等领 F21)，本实验室保藏。 域。当前富马酸生产的主流技术是顺酐异构法，其原 1．2培养基 料苯的毒性严重限制了富马酸在食品及医药等方面 产孢斜面培养基(g／L)：葡萄糖4，乳糖6，甘油 的应用[1’2]。近年来随着石油价格的不断上涨，富马 酸的生产成本也不断提高，研究利用可再生的生物质 KH2P04 0．3，ZnS04·7H20 0．4，MgS04·7H20 资源发酵制备富马酸成为大势所趋。 0．25，NaCl 0．1，FeS04·7H2030，琼脂50。 发酵法制备富马酸的常用菌种为根霉菌(Rhi- zopus)，如米根霉(R．oryzae)、少根根霉(R．口r砌i— 0．4，ZnS04 母膏2．4，KH2P040．8，MgS04·7H20 zus)以及黑根霉(R．nigricans)等，使用的原料有葡 ·7H200．05，FeSO。·7H200．01，琼脂2，硫酸调 萄糖、木糖、淀粉等，在发酵过程中产生的主要副产物 3．5。 节pH 为苹果酸、乳酸等杂酸[3卅]。我国山西微生物研究所 发酵基本培养基(g／L)：葡萄糖100， 的白照熙等筛选出了一株具有产富马酸能力的少根 根霉并对其培养条件进行了初步的优化，考察了单因 KH2P040．4，MgS04·7H20 素对富马酸合成的影响[9’1引，但存在着产量偏低、副 0．05，FeS04·7H200．01，甲醇15mL。使用Ca- 产物较多，发酵时间较长等问题。发酵法制备富马酸 CO。为中和剂，添加过量的CaCO。保持培养基的pH 难以实现产业化的瓶颈在于富马酸产量低及糖质原 基本为5．5。 料的转化率低下。 1．3培养方法 本文以少根根霉为发酵菌种，采用中心复合设计 菌株在产孢斜面上培养5～7d之后，使用无菌 对发酵培养基的碳源、氮源等关键影响因素进行响应 的0．05 mol／L磷