竞争超迁移EMSA服务案例.docxVIP

代理商公司简介 竞争超迁移EMSA服务案例  竞争超迁移EMSA服务案例 实验目的 利用待检测转录因子对应的DNA探针和抗体，对1例细胞核蛋白提取物进行竞争超迁移EMSA检测。 实验目的 根据特异性的探针序列合成生物素标记的探针和非生物素标记的探针，进行相应的结合反应后进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，经过电转将胶上的蛋白-DNA结合物及未结合的DNA转移到尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，用酶反应显色，从而检测DNA与蛋白有无结合条带。 操作步骤 1.核蛋白提取：参考Thermo Scientific 试剂盒NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents。 1.1 采用预冷的PBS冲洗样品； 1.2 转移至1.5 ml离心管中，500×g，离心3 min； 1.3 小心弃去上清，备用； 1.4 加入预冷的CER I（含Protease Inhibitor）100 μl； 1.5 剧烈votex 15 s，冰浴10 min； 1.6 加入预冷的CER II 5.5 μl； 1.7 剧烈votex 5 s，冰浴1 min； 1.8 剧烈votex 5 s，16000×g，离心10 min； 1.9 立即吸取上清至一预冷的离心管中，即为抽提得到的组织浆蛋白； 1.10 加入预冷的NER （含Protease Inhibi