海水养殖废水中氨氮降解菌的诱变及培养条件-水产科学.PDF

第30卷第3期 水产 科 学 V01．30No．3 2011年3月 FISHERIESSCIENCE Maf．2011 海水养殖废水中氨氮降解菌的诱变及培养条件 宋霖霞，王素英 (天津商业大学天津市食品生物技术重点实验室，天津300134) 摘要：以蛋白酶产生菌ZS7、亚硝化细菌ZW38和反硝化细菌ZL5为出发菌株，经微波和亚硝基胍复 合诱变，分别获得相应的高效菌株YS5、YW5和YL3．YS5菌株在37℃、pH6．8～8．0时，发酵产酶能 6．O～ 力最强。蛋白酶活力为2．471×103U／ml。为出发菌株的2．2倍。亚硝化细菌YW5在37℃、pH 7．2时。亚硝酸盐的生成速率最快，为3．39mg／(L·d)。为出发菌株的1．5倍；反硝化细菌YL3在37 6．o～7．2时，还原亚硝酸盐的速率最快．为3．05mg／(L·d)，为出发菌株的1．7倍。 ℃、pH 关键词：养殖废水；亚硝基胍；亚硝化细菌；反硝化细菌；富营养化 中图分类号：Q939．11 文献标识码：A 文章编号：1003—111112011)03-0148-04 海水养殖集约化发展[1]，产生大量残饵和动物 排泄物，导致水体富营养化现象频频发生，因此净 化水产养殖废水．对改善养殖用水质量及防治养殖 f越5sp．)。 动物的病害，具有重要意义[2]。 蛋白酶产生菌的斜面培养基、液体发酵培养基 氨氮化合物是富营养化水体的主要污染物，主 和产酶鉴别培养基参照参考文献E5]、E63。亚硝化 要来源于残饵和动物排泄物中蛋白质的降解。降 细菌和反硝化细菌的液体发酵培养基及分离培养 解氨氮可用物理、化学和生物方法，其中生物法具 基参照参考文献[7]、[8]。 有工艺简单、成本低廉、较易推广等特点，受到人们 1．2方法 的青睐。硝化细菌和反硝化细菌是最早广泛应用 1．2．1菌悬液的制备 于水体除氮的菌种。刘瑞兰【3]利用从活性污泥中 斜面保藏菌株连续活化后，接种于50ml液体 定向富集分离到的硝化细菌对鱼缸水质进行处理， 培养基中振荡培养，取对数生长期的发酵液6000 降低了金鱼(Carassiusauratus)的死亡率，去除了r／min离心10min收集菌体，用pH7．0的PBS溶 水体中约51％的氨态氮；周鑫等“]将海水养殖废水 液洗涤3次后，制成106cfu／mI的菌悬液备用。 中分离获得的亚硝化细菌、反硝化细菌和蛋白酶产 1．2．2诱变方法 l 1．2．1 生菌以3 2；1的比例混合，使用量为109cfu／ml， 亚硝基胍(NTG)诱变后再进行微波诱变处 经过5d处理，海水养殖废水中的可溶性蛋白和氨 理 态氮的去除率分别达94．o％和77．5％。本研究将 在1．5ml菌悬液中加入0．5ml亚硝基胍母 通过诱变措施，提高从海水养殖废水中分离获得的 液，30℃，150r／min，反应90min，终止反应后用4 蛋白酶产生菌ZS7菌株的产蛋白酶能力，及亚硝化 ℃的生理盐水稀释100倍后均匀分成4份，用700 W，2450MHz的微波分别辐照30、60、90s和 细菌ZW38菌株产生亚硝酸盐和反硝化细菌ZL5 120 菌株在好氧条件下还原亚硝酸盐的能力，从而提高 s后，冰水浴2h，将Iml各组诱变处理后的菌 去除水体含氮污染物的能力。 悬液涂布