浮萍多糖总糖含量测定与评价.PDFVIP

2005年1O月 重庆大学学报(自然科学版) Oct．20o5 第28卷第10期 Journal of Chongqing University(Natural Science Edition) V01．28 No．10 文章编号：1000—582X{2005)1O—O111—04 浮萍多糖总糖含量测定与评价’ 周 菁，王伯初，王 阳 (重庆大学生物工程学院教育部生物力学与组织工程重点实验室，重庆 400030) 摘 要：草本植物浮萍中提取的多糖类化合物经实验证明具有免疫增强活性．探索浮萍多糖提取物 总糖含量的测定方法并对该方法进行评价，同时将其用于浮萍多糖生产制备中的质量控制．采用分光光 度法，分别经苯酚一硫酸和蒽酮一硫酸显色，测定浮萍多糖提取物中的总糖含量，并通过线性和范围、精 密度、稳定性和准确度等指标评价该方法．实验结果显示苯酚一硫酸法和蒽酮一硫酸法测浮萍多糖所需 设备简单、操作快速、结果稳定、灵敏度高，可将其作为浮萍多糖提取物中总糖含量测定的有效方法． 关键词：浮萍；多糖；含量测定；评价 中图分类号：R282．71 文献标识码：A 浮萍(／-／erba Spirodelae SelZ 玎l船e)为浮萍科植物 1．2 实验方法 紫背浮萍(Spirodela Polyrrhiza(L)sc )或青萍 1．2．1 浮萍多糖的提取分离 (Lemna minor L)的全草，在中国各地分布广泛、资源 取粉碎后的浮萍药材，以1：20的料水比加水， 丰富，作为传统中药人药．浮萍多糖¨ 是本研究组从 NaOH调pH至9，沸水提取2次．合并滤液，减压浓缩， 浮萍中提取的主要水溶性成分，经初步药效学试验，发 滴加10％三氯乙酸至pH 2～3，5～10℃静置过夜后 现浮萍多糖能够明显改善环磷酰胺致免疫力低下KM 离心取上清，超滤(截留分子量6 ooo)，取浓缩液加人 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的功能，并显著提高 4倍体积无水乙醇，冷藏静置后取沉淀，将沉淀溶于 健康KM小鼠的碳粒廓清能力，提示浮萍多糖是一种 水，重复醇沉操作6次，取沉淀溶解后冷冻干燥得浅棕 很有发展前景的免疫调节剂原料药．笔者采用硫酸一 色浮萍多糖粉末 】． 苯酚法和硫酸一蒽酮法对浮萍多糖中的有效部位即总 糖的含量进行了测定，并通过线性和范围、精密度、稳 I．2．2 苯酚一硫酸法测定总糖含量 定性和准确度等指标对两种方法进行了评价和比较． 1)最大吸收波长的选择：精密吸取一定浓度的样 品溶液1．0 mL加人具塞试管，补水至2．0 mL，精密加 1材料与方法 人6％重蒸酚溶液1．0 mL，迅速加人浓硫酸5．0 mL， 1．1 实验材料和主要仪器 盖上塞，摇匀，静置10 rain后，置3O c【=水浴10 rain，按 浮萍药材购自太极集团沙坪大药房，重庆大渡口 分光光度法在380～580 nm波长范围内测定吸光度， 中药材公司中药饮片厂，产地四川，经紫外光谱鉴别为 确定其最大吸收波长，得A =485 nm ． 紫萍Spirodela Polyrrhiza( ．)Schleid．的干燥全草；重 2)标准曲线的制备：精密称取105 cI=干燥至恒重 蒸苯酚(北京鼎国生物技术发展中心)，