培养细胞的免疫荧光标记方法.DOCVIP

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2020-04-07 发布于天津
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培养细胞的免疫荧光标记方法.DOC

培养细胞的免疫荧光标记方法培养细胞用PBS分三次取代培养皿中的培液，取出盖玻片置于PBS中，在预冷的4%PFA中4?C固定30min，PBS洗去固定液。 1、培养细胞的免疫荧光反应：（免疫荧光反应在密闭避光的湿盒中进行，以保持抗体作用浓度、及稳定性）经固定的培养细胞盖玻片 ? 0.05%Triton 室温5min ? PBS 5min ? 2 ? 含0.5%NS、1%BSA的PBS中室温封闭30min~1hr ? 一抗（稀释过）室温 1~1.5hr或4?C 过夜 ? PBS 10min ? 3 ? 二抗-荧光基团（稀释过）室温 30min~1hr ? PBS 10min ? 3 ? DAPI（稀释过）室温5-10 min ? PBS 5min ? 2 ? 荧光封固剂封片 ? 4?C或-20?C避光保存 2、培养细胞的免疫荧光双标记方法：免疫标记方法与上述方法相同，不同种属来源的两个一抗可同时加入反应液中，同样，两种相应的二抗也可同时加入反应液中。