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(1)无搅拌式超滤: 这种装置比较简单,只是在密闭的容器中施加一定压力,使小分子和溶剂分子积压出膜外,无搅拌装置浓度极化较为严重,只适合于浓度较稀的小量超滤。装置的基本结构与工作原理见图7所示。 (2)搅拌式超滤 搅拌式超滤是将超滤装置位于电磁搅拌器之上,超滤容器内放入一支磁棒。在超滤时向容器内施加压力的同时开动磁力搅拌器,小分子溶质和溶剂分子被排出膜外,大分子向滤膜表面堆积时,被电磁搅拌器分散到溶液中。不容易产生浓度极化现象,提高了超滤的速度。装置的基本结构与工作原理见图8所示。 (3)中空纤维超滤 中空纤维超滤是在一支空心柱内装有许多的中空纤维毛细管,两端相通,管的内径一般在0.2mm左右,有效面积可以达到1.0cm2,每一根纤维毛细管像一个微型透析袋,极大的增大了渗透的表面积,提高了超滤的速度。中空纤维超滤是以液压为动力,通蠕动泵或液压泵将需要超滤的样液注入每一根中空纤维管内。当样液经压力泵以较高的流速送入每根膜细管时,样液从底部往上端流出,经过流量阀时,阀门只打开一部分(是全流速的1/4-2/3左右),流速减慢,中空纤维管内产生很大的内压,一部分溶质小分子和溶剂分子被挤出管外,一部分溶质小分子和溶剂携带着大分子通过流量阀,回流到储液瓶,与剩余的样液混合,完成一次超滤。混合后的样液再次经液压泵送入中空纤维管内超滤。每经过一次循环,分离出去一部分溶质小分子和溶剂分子,大分子不断被浓缩。如果要将大分子和小分子分离比较完全,可将浓缩液稀释若干倍后再次超滤。 中空纤维超滤主要适用于脱盐、浓缩、样品分级分离等。装置的基本结构与工作原理见图9所示。 (4)模块式超滤技术 3.4几种超滤装置性能的比较 将上述几种超滤装置的性能归纳比较, 超滤装置 表面积(cm2) 操作压(磅/吋2) 流量(ml/min) 标注流量(ml/min.cm2.磅) 无搅拌型 3.4 70 0.05 0.002 搅拌型 39 50 2.7 0.0014 中空纤维 900 7 50.00 0.007 ? 3.5分级分离 可以采用不同截留分子量的中空纤维超滤柱,进行分级分离。目前额定截留分子量的中空纤维超滤柱截留有3000、5000、 10000、 30000、60000 Da等。 如果超滤物质分子量为5000、20000、35000Da,先用截留分子量30000 Da的中空纤维柱超滤,滤出液再用截留分子量10000 Da的中空纤维柱超滤,滤出液再用截留分子量3000 Da的中空纤维柱超滤。 3.6 中空纤维柱的选择及使用 (1)? 中空纤维柱的选择:一般选择低于样截留分子量的20%膜进行超滤 例如超滤物质分子量为6000Da, 最好选用截留量为5000以下的膜超滤. 因为蛋白质分子一般都是柔性的,会有20%-30%的样品分子透过。也就是有20%-30%的样品损失。 (2) 流速: 在一定的压力下, 一般每分钟通过单位面积的液体量来表示. (采用液体为纯水),不同的膜有不同的要求, (3) 中空纤维柱的保存:中空纤维柱一般可以连续使用1-2年。若暂时不用,可在1%甲醛或5%甘油中保存, 防止细菌生长和干燥。 3.7影响超滤的几个因素 (1) 溶质的分子性质: 主要包括分子量,形状,带电性等。 (2) 溶质浓度: 浓度越高,流速越慢,不利于超滤.。这种情况下,可以先稀释,再超滤. (3) 压力: 一般情况,压力越大, 流速越高, 但浓度极化现象越严重, 这是一对矛盾,可适当控制液压和样品浓度,如果样液浓度高,压力适当低一些,以防止过早出现浓度极化现象。样液浓度低,压力适当高一些。 (4) 温度: 温度升高, 可以降低溶液粘度, 有利于超滤. 但对于生物活性物质来说, 一般都要求在低温下(4℃)超滤, 因此,生物活性物质不能同过升温来提高超滤速度。 3.8超滤的应用 (1) 分级分离: 根据被分离物质分子量的大小不同, 选择不同截留量的滤膜, 可以将各组分分离, 类似于分子筛。 (2) 浓缩: 将很稀的溶液通过超滤将所需组分浓缩。 (4)? 脱盐和浓缩: 样品液中含有较多的无机盐,可以通过超滤 —→浓缩 —→稀释 —→超滤—→浓缩,多次重复将盐除去。 第四节 电渗析与离子交换膜电渗析技术 1 电渗析 1.1基本原理: 电渗析技术是在半透膜的两侧施加一定的电压,使带电的一些小分子在电场的作用下透过半透膜彼此分开。该技术可用于生物大分子脱盐纯化。电渗析容易产生大量的热,因此在渗析过程中需要冷却。 1.2电渗析的基本装置: 在一个容器中用两块半透膜隔成三个池,两侧池为电极池,存放纯溶剂或水;中间池为样品池,存放被分离样液。通电后,中间池样液中的阳离子或带正电荷的小分子就会透过半透膜移向阴极池,阴离子或带负电荷的小分子就会
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