小鼠尾巴基因组抽提.DOC

实验一 瓶中基因的提取（口腔DNA的提取） 一、实验原理： 从动物组织和细胞中提取DNA。DNA存在于细胞核中。提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。 二、实验准备： 水浴锅（预先调至55℃） 一次性纸杯 吸管 计时器 移液器及Tips 试剂： ① 裂解液Lysis Buffer配方：100mM Tris-HCl (pH8.5) 5mM EDTA 0.2% SDS 200mM NaCl ② 蛋白酶K：储存液20mg/ml，使用终浓度200μg/ml。用H2O配制。 ③ 3mol/L乙酸钠（pH5.2）：800ml水中溶解408.1g三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2，加水定容至1L，分装后高