第一法酶水解法.PDF

第一法 酶水解法 一、目的与要求： 1、明确与掌握各类食品中淀粉含量的原理及测定方法。 2、掌握用酶水解法和酸水解法测定淀粉的方法。 二、原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用 盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。 三，试剂： 1、0.5％淀粉酶溶液：称取淀粉酶0.5 克，加100 毫升水溶解，数 滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。 2、碘溶液：称取3.6 克碘化钾溶于20 毫升水中，加入1.3 克碘， 溶解后加水稀释至100 毫升。 3、乙醚 4、85％乙醇 5、6N 盐酸：量取50 毫升盐酸加水稀释至100 毫升。 6、甲基红指示液：0.1％乙醇溶液。 7、20％氢氧化钠溶液。 8、碱性酒石酸铜甲液：称取34.639 克硫酸铜(CuS0 ·5HO)。加适量水 4 2 溶解，加0.5 毫升硫酸，再加水稀释至500 毫升，用精制石棉过滤。 9、碱性酒石酸铜乙液：称取173克酒石酸钾钠与50克氢氧化钠， 加适量水溶解，并稀释至500 毫升，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻 璃瓶内。 10、0.1000N 高锰酸钾标准溶液。 11、硫酸铁溶液：称取50 克硫酸铁，加入200 毫升水溶解后，人1 00 毫升硫酸，冷后加水稀释至1000 毫升。 四、操作方法： 1、样品处理： 称取2-5 克样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 毫升乙醚 分5 次洗除脂肪，再用约100 毫升85％乙醇洗去可溶性糖类，将残留物 移入250毫升烧杯内，并用 50 毫升水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内， 将烧杯置沸水浴上加热15 分钟，使淀粉糊化，放冷至60℃以下，加20 毫升淀粉酶溶液，在55-60℃保温1 小时，并时时搅拌。然后取1 滴此 液加1 滴溶液，应不显现蓝色，若显蓝色，再加热糊化并加20 毫升淀 粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显蓝色为止。加热至沸，冷后移入2 50 毫升容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤，弃去初滤液。取50 毫 升滤液，置于250毫升锥形瓶中，并加水至刻度，沸水浴中回流1 小时， 冷后加2 滴甲基红指示液，用20％氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入 100 毫升容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并人100 毫升容量瓶中，加水至 刻度，混匀备用。 B、测定： 吸取50 毫升处理后的样品溶液，于400 毫升烧杯内，加入25 毫升 碱性酒石酸铜甲液及25 毫升乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制， 在4 分钟内沸腾，再准确煮沸2 分钟，趁热用铺好石棉的古氏坩埚或c 4 垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不呈碱性为止。 将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400 毫升烧杯中，加25 毫升硫酸铁溶液 及25 毫升水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以0.1000N 高锰酸钾 标准溶液滴定至微红色为终点。 同时量取50 毫升水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液，按同一 方法 做试剂空白实验。 计算：X1=((A -A )×0.9)/( m ×50/250×V1/100×1000)×100 1 2 1 X ：样品中淀粉的含量，％； 1 A ：测定用样品中还原糖的含量，mg； 1 A ：试剂空白中还原糖的含量，mg； 2 0.9：还原糖(以葡萄糖计)换算成淀粉的换算系数； m ：称取样品质量，g； 1 V ：测定用样品处理液的体积，毫升(m1)。 1 第二法 酸水解法 一、原理： 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用酸水解成具有还原性 的 单糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉。 二、试剂： 1、乙醚； 2、85％乙醇溶液； 3、6N 盐酸溶液； 4、40％氢氧化钠溶液； 5、10％氢氧化钠溶液； 6、甲基红指示液：0.2％乙醇溶液 7、精密PH 试纸 8、20％乙酸铅溶液 9、10％硫酸钠溶液 10、乙醚 11、碱性酒石酸铜甲液。 (配制见前) 12、碱性酒石酸铜乙液； (配制见前) 13、硫酸铁；