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实验十. 质粒的提取、 分析和凝胶电泳 目的与要求 学习分子遗传学的基本操作。 掌握质粒的遗传特性及其DNA的提取原理。 质粒的提取 取37oC振荡培养16-18小时的E.coli菌液1.2ml。 12000rpm离心30秒钟，弃上清液，强力振荡将沉淀打开。 加终浓度0.1mol/LNaOH与0.5%SDS混合液200ul,轻微混匀(上下颠倒离心管)后加200ul 3 mol/L NaAC,轻微混匀后冰浴10分钟。 14000rpm离心6分钟，取上清液于另一微量离心管中(总量350μl)。 质粒的提取 加800ul 95%乙醇，轻微混匀 13000rpm离心5分钟，弃上清液 加800ul 75%乙醇，轻微混匀后13000rpm离心5分钟，弃上清液 加30ul 无菌水溶解质粒DNA,0oC以下保存。 质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳 制胶：以0.8%琼脂糖制凝胶，以1X电泳缓冲液溶解琼脂糖，温度降至50oC左右时加EB(溴化乙锭,终浓度0.5μ g/ml）。 提取的质粒约DNA10ul加2ul加样缓冲液（含0.25%溴酸蓝和40%蔗糖），混合后注入加样孔中。 以5V/cm胶长电泳2小时。 紫外灯下观察凝胶电泳泳带。 思考题 核酸分子的高级结构与其电泳迁移的关系？ DNA的染色机理是什么？ 试分析NaAC的作用机制？ 开环 超螺旋 复制过程 超螺旋 线性 * *
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