基因工程 抗体1.ppt

the leader in enzyme technology PhDTM Phage Display System 用于 PhD 中的噬菌体是 M13KE 由M13mp19衍生的溶源性噬菌体。 随机７肽与次要衣壳蛋白N-端 融合，经细胞膜分泌，噬菌斑 模糊不透明，用有α-互补的宿 主菌在含Xgal/IPTG的平板上可 呈蓝斑 。 融合蛋白表达时N端有一段 信号肽前导序列，蛋白分 泌后前导序列被切除，使 随机七肽直接展示于成熟 蛋白的N端。 the leader in enzyme technology 噬菌体展示肽库 E. coli ER2738 宿主菌 - 28 gIII 测序引物 （用于人工测序） - 96 gIII 测序引物 （用于自动测序） 链霉亲和素 Streptavidin 生物素 试剂盒组成 the leader in enzyme technology 文库克隆载体可以买到吗？ ? ? ? ? 用 来 构 建 所有这三种Ph.D.文库的载体， M13KE （# E8101S）， 是 可 以 购 买 到 的。 M13KE 是M13mp19 的 衍 生 株 ， 其pIII 基 因的5 ’端构建了限制性酶切位点，用户 可 以 将 设 计 好 的 人 工 基 因 盒 （ synthetic cassette） 插 入 此 处 构 建自己的肽库。 因为M13KE是噬菌体，而不是噬菌粒载体，所以在已加工的病毒子 上所有5个拷贝的pIII蛋白均携带有展示肽序列。 另外，大于20-30个氨基酸的展示多肽会影响噬菌体的感染力，所 以此载体仅适合展示短的多肽。 the leader in enzyme technology M13K07 Helper Phage ? ? ? ? 由M13衍生而来。在M13复制起始点处，插入有卡那 霉素抗性基因。 能在无噬菌质粒的情况下复制。 当有噬菌质粒时，由于噬菌质粒含有野生型M13或 者f1复制起始点，因此，单链噬菌质粒的DNA会被 优先包装并分泌。 不能用M13KO7作为克隆载体，如果要克隆噬菌体展 示库，建议使用M13KE噬菌体克隆载体。 the leader in enzyme technology M13噬菌体与其他噬菌体比 较有什么优点？ ? ? ? M13噬菌体为非裂解性噬菌体（溶源性），周质内组装，经细胞 膜分泌，噬菌斑的形成不是由于菌体裂解而是由于细胞生长力减 弱所致，因此噬菌斑是浑浊的而不是清亮的，用有α -互补的宿主 菌在含 Xgal/IPTG的平板上可呈 蓝斑 。 由于 M13噬菌体在增殖期间不裂解宿主菌。简化了噬菌体纯化步 骤，只用简单的 PEG沉淀方法就足以将噬菌体与其他所有污染的 细胞蛋白分开。 而其他用于噬菌体展示的噬菌体如： T7, T4和 Lambda噬菌体均 为裂解性噬菌体，每轮淘选之间都需要花时间进行纯化，以避免 淘选扩增的噬菌体污染有细胞蛋白（如：有些蛋白酶类物质会在 淘选时将靶分子降解掉）。 the leader in enzyme technology NEB的噬菌体文库能展示cDNA 文库吗？ ? ? 不适合于 cDNA文库展示，因为这种表达需要使目的蛋白序列在 前导序列（蛋白分泌所需要的）和噬菌体包膜蛋白 pIII或 pVIII的 N 端序列之间保持读码框架一致，这样产生的 M13 cDNA文库中， 能有效表达的克隆会非常少。 Novagen的 T7 Select 噬菌体展示系统可以将 cDNA插入片段融 合在包膜蛋白的 C末端，但是该系统利用的是裂解性噬菌体 T7而 不是溶源性噬菌体 M13，淘选扩增的噬菌体可能会污染有细胞蛋 白，故需要化更多的时间进行噬菌体的纯化。 货号 产品名称 规格 价格 E8100S Ph.D.-7 噬菌体表面展示试剂盒 10次淘选 E8110S Ph.D.-12 噬菌体表面展示试剂盒 10次淘选 E8120S Ph.D.-C7C 噬菌体表面展示试剂盒 10次淘选 E8101S Ph.D.多肽展示克隆系统 20 μ g the leader in enzyme technology NEB提供的三种随机肽库 the leader in enzyme technology Recombinant Phage Antibody system 用于克隆、表达和检测小鼠抗 体基因 噬菌质粒-Helper phage系统 抗体片段克隆于噬菌质粒与 pIII蛋白融合展示在M13噬菌 体表面 Helper ph