荞麦花叶黄酮对糖尿病大鼠餐后血糖及胰岛素敏感-第三军医大学学报.DOC

PAGE PAGE 3 荞麦花叶黄酮对2型糖尿病大鼠血糖稳态的影响 韩淑英1，张博男1，张静怡2，韩 婷1，储金秀1，白 静1 （063000河北 唐山，河北联合大学基础医学院药理学系1；063000河北 唐山，唐山工人医院心血管内科2） [摘要] 目的 观察荞麦花叶黄酮(flavones of buckwheat flower and leaf, FBFL)对糖尿病大鼠血糖波动的影响。方法 以PNPG为底物，测定不同浓度FBFL对α-葡萄糖苷酶活性的影响；用高脂饲料和小剂量链脲佐菌素（STZ）建立2型糖尿病（T2DM）胰岛素抵抗（IR）大鼠模型，用不同剂量FBFL干预6周，测定大鼠随机血糖、餐后血糖的动态变化，禁食24 h内血糖波动及糖耐量情况。结果 FBFL对α-葡萄糖苷酶活性有明显的抑制作用，IC50为4.205 mg/L，与阿卡波糖的效价比约为15.24∶1；FBFL能降低糖尿病大鼠随机和餐后血糖值（P＜0.05），并改善糖耐量，有明显的剂量和时间依赖性。结论 FBFL可降低糖尿病大鼠随机和餐后血糖值，对血糖波动有稳定作用，其机制可能是通过抑制α-葡萄糖苷酶活性实现的。 [关键词] 荞麦花叶黄酮；血糖稳态；T2DM；α-糖苷酶 [中图法分类号] [文献标志码] A [基金项目] 河北省自然科学基金项目（C2010001795）；唐山市重点实验室项目） [通信作者] 韩淑英,E-mail:shuyinghan59@126.com [优先出版] HYPERLINK /kcms/detail/51.1095.R1457.010.html /kcms/detail/51.1095.R1457.010.html（2013-09-14） 荞麦花叶黄酮(flavones of buckwheat flower and leaf, FBFL)为甜荞麦花叶提取的黄酮类成分，具有改善胰岛素抵抗，降低血糖，抑制或延缓并发症发生发展的作用[1-2]。课题组前期研究发现FBFL对α-葡萄糖苷酶活性有抑制作用，并能抑制餐后血糖的升高[3]。在前期研究[4]的基础上，本研究以PNPG为底物，进一步测定FBFL对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用及其强度，观察FBFL对糖尿病大鼠血糖波动的影响，并探讨其可能机制，为FBFL临床应用提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 主要材料 荞麦花叶为甜荞麦子粒收割后自然干燥的花叶（采自内蒙古库伦旗，经本校生药学专家鉴定），阿卡波糖(拜尔医药保健有限公司，批号，α-葡萄糖苷酶(Sigma公司)，4-硝基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷(PNPG，Merck公司)，还原型谷胱甘肽(北京欣经科生物技术有限公司），链脲佐菌素（STZ，Sigma公司），血糖试剂盒(上海科华东菱诊断用品有限公司，批号:。X-22R低温离心机(德国BECKMAN公司)，MH2000电子水浴恒温槽(北京医疗设备总厂)，酶标仪(BIO-RAD)，血糖检测仪及配套试纸（韩国唐博士），THZ-82B型汽浴恒温振荡器（江苏省金坛市医疗仪器厂）。 1.2 FBFL的制备 荞麦花叶粉碎后用蒸馏水加热提取2次，滤液浓缩，加分离剂(酸性壳聚糖)搅拌，趁热过滤，滤液静置沉淀，过滤得黄色沉淀物，为总黄酮（用紫外分光光度法，以芦丁为标准，测得黄色沉淀物中总黄酮含量达95%)。 1.3 FBFL体外对α-葡萄糖苷酶活性的影响 参照Matsui等[5]方法略作改进，以PNPG为底物测定FBFL对α-葡萄糖苷酶活性的影响。反应在96孔板上进行，分别向板孔中加入不同稀释度的FBFL和阿卡波糖（ACAR）100 μL（样品终浓度为0.01～100 mg/L)、50μL还原性谷胱甘肽(1 g/L)及25 μL α-糖苷酶(10 U/L)，37℃保温10 min，加入50 μL PNPG(40mmol/L), 37℃保温15 min，加入60μL Na2CO3(2 mol/L)终止反应。酶标仪测定505 nm波长下光密度值，同时设阳性酶和空白对照，每个样品作5复孔。计算药物对α-糖苷酶的抑制率。抑制率=[1－D（505）药物/D（505）阳性酶]×100%，并采用Bliss法计算α- 1.4 2型糖尿病模型的建立[6-7]与分组给药 SPF级雄性SD大鼠（北京维通利华动物有限公司）70只，7～8周龄，体质量(200±20) g，合格证号SCXK(京) 2006-0009，取10只作为正常对照组，给予普通饲料。余60只高脂饲料喂养16周，之后空腹12 h尾静脉注射STZ