试验10糖类之监定及旋光度与浓度间之关系旋光测量法.DOC

PAGE PAGE 2 實驗10 糖類之鑑定及旋光度與濃度間之關係(旋光測量法) 第6組 主筆：連鎮頡 一、目的： 了解旋光測定之原理及旋光計的操作。 了解旋光測定之應用。 了解利用旋光儀鑑別糖類。 了解旋光度與濃度間之關係 二、原理： 一般自然光束其電磁向量為不定向排列，稱其為非極化光(unpolarized light)；如果只在單一的平面上振動，其所成的波光，則稱為平面極化光(plane polarized light)。當平面極化光通過具有光學活性(optically active)的物質時，因此類的結構並不對稱（含不對稱之碳原子）；就可使平面極化光作定向的改變，藉極化平面光旋轉的方向及能力的測定結果，即可鑑別具有光學活性的物質（定性），並作蔗糖的的定量，此項測定的儀器即為旋光或偏光儀。偏光儀重要的組成原件如下圖示： 鈉燈 偏極鏡 試樣管 分析用稜鏡 目鏡 當平面極化光通過光學活性物質，使平面極化光作順時針旋轉的物質，稱為右旋物質，以 “ + ”或d表示之。如使平面極化光作逆時針旋轉的物質，稱為左旋物質，以“－”或l表示之。其所測得之旋光度可從刻度盤上讀出。 光學活性物的旋光度於測定時，常受波長、溫度、溶劑物質等因素的之影響，所以測定的條件必須加以說明；如溫度（t℃），通常為20℃ 測試管長（l）單位為dm公寸（1dm=10cm），就這些條件下單位濃度（g/mL），單位長度所測得旋光度α，就稱為比旋光度（specific rotation），而以符號 [α]20D表示之，其關係是如下： α = [α]20D l*C 旋光性物質 溶劑 溫度 [α]20D 樟腦 醇 25 +43.8 蔗糖 水 20 +66.5 葡萄糖 水 20 +52.5 果糖 水 20 -93.0 麥芽糖 水 20 +136.9 乳糖 水 15 +56.0 [α]20D = 觀察旋光度α /測管長(dm)*溶液濃度（g/ml） 表1 溶液的比旋光度[α]20D 儀器： Polax-D TYPE POLARIMETER 測試管（10㎝） 1支 吸量管 (10 mL) 1支 量瓶（50 mL） 4個 溫度計（100℃ 量瓶（25mL） 3個 試藥： 蔗糖 葡萄糖 果糖 未知糖（老師供給） 操作步驟： A.糖類鑑定： 糖溶液之配製： 已知糖類：取稱量瓶四個，分別精稱（a）蔗糖（b）果糖（ｃ）葡萄糖(d) 未知糖各5g，將此四種糖分別放入100mL燒杯中，加15mL水溶解，再移入25mL量瓶中，再以純水稀釋至刻度，並攪動使均勻，記錄糖的濃度（5g 旋光計操作步驟及測量： (A)開機 （1）按下POWER電源開關 （2）輕按Lamp開關10秒後放手，鈉燈亮 (B)調整零點： （1）取觀測管裝滿蒸餾水，放在試樣台上。 （2）眼睛看目鏡，調整目鏡焦距使影像清晰，按Rotate鈕 R⊕(右旋) or L?(左旋)，直到影像明暗半影會來回交替，取兩者之間左、右亮度相同(如下圖)。 讀取旋光度之影像 ↓ （3）若Zero之指示燈亮時（綠色），按下Zero及自動歸零。 **注意：若指示燈未亮，及按下Zero鈕，會造成誤差 (C)試樣溶液分析： （1）取測試管裝滿試樣溶液，放置於試樣台上 （2）按Rotate鈕 R⊕(右旋) or L?(左旋)，直到影像明暗半影會來回交替，取兩者之間左、右亮度相同時，記錄旋光度之值。 B、濃度與旋光度之關係測定： 照A中的方法配製任一已知旋光性溶液，用(C)項操作步驟，測定溶液之旋光度α，並記錄之。 用吸量管取糖試液12.5mL，至入25mL的容量瓶中，加水刻度，搖動使均勻，糖的濃度（ 將第2步驟中的稀釋液，以同樣方法再作第二次的稀釋，糖的濃度（0.05g/mL） 繪製[α]20D 對濃度（C）的曲線 註：1.遮蓋及試樣管內外必須清潔及乾燥。 2.測試管試液要充滿，如有氣泡存在會影響觀測。 3.盡可能的使試液無色。 4.混濁試樣溶液過濾後再行測定。 結果及數據之整理： 1. 試料重 蔗糖 葡萄糖 果糖 未知糖 重量（g） 5.0100 5.0040 5.0172 5.0441 2.由公式計算比旋光度[α]20D 類別 α 濃度 g/ml [α]20D 蔗糖1 10.25 0.2 51.25 蔗糖2 5.15 0.1 51.50 蔗糖3 2.55 0.05 51.00 葡萄糖1 13.25 0.2 66.25 葡萄糖2 6.65 0.1 66.50 葡萄糖3 3.35 0.05 67.00 果糖1 -18.65 0.2 -93.25 果糖2 -9.3