叶面喷施不同浓度ALA对黄瓜幼苗抗氧化酶系统的影响.docVIP

叶面喷施不同浓度ALA对黄瓜幼苗抗氧化酶系统的影响 摘要：为了探讨叶面喷施5-氨基乙酰丙酸（ALA）在黄瓜苗期的施用浓度和效果，以黄瓜品种津春4号3叶1心期的幼苗为材料，研究了不同浓度ALA对黄瓜幼苗叶片光合色素含量和抗氧化酶系统的影响。试验结果表明，叶面喷施10、30、50mg/L的ALA可明显提高黄瓜叶片叶绿素（Chl）和类胡萝卜素（Car）含量，降低Chla/b比值；显著增加超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、抗坏血酸过氧化物酶（APX）和过氧化物酶（POD）活性，脯氨酸和可溶性蛋白含量；降低超氧阴离子（O2-?）生成速率、过氧化氢（H2O2）和丙二醛（MDA）含量；当ALA浓度达100mg/L时，黄瓜幼苗受到一定的氧化胁迫伤害。这些结果说明，喷施浓度不超过100mg/LALA可促进黄瓜幼苗叶片光合色素的合成、增加其抗氧化能力，降低膜脂过氧化的程度，综合各项指标，以30mg/L的ALA叶面喷施浓度在黄瓜幼苗上效果最佳。 关键词：黄瓜；5-氨基乙酰丙酸（ALA）；叶绿素；抗氧化酶；氧化胁迫 中图分类号：S642.2文献标识码：A文章编号：1001-3547（2017）20-0088-05 5-氨基乙酰丙酸（ALA）是所有生物体内卟啉化合物（包括叶绿素、亚铁血红素、光敏素等）生成合成的第一个关键前体，与植物的光合作用、呼吸作用等有着密切关系，能够调节植物的生长发育，促进作物的产量，提高植物的抗逆性[1～3]。然而ALA在黄瓜上的作用效果和施用浓度，目前存在著很大的差异。刘玉梅等[2]认为0.5mg/LALA喷洒幼苗可以提高黄瓜品种津优1号叶片净光合速率（Pn）和光化学效率，提高黄瓜幼苗亚适宜温光环境的光合适应性。Zhen等[3]则认为50mg/LALA缓解盐胁迫对津春2号黄瓜造成的伤害最明显。Tripathy等[4]研究表明，喷施20mmol/LALA能够造成黄瓜的光合电子传递链的光动力损伤。为了确定叶面喷施ALA在黄瓜幼苗期的最佳施用浓度和应用效果，本试验以黄瓜（CucumissativusL.）品种津春4号为材料，研究叶面喷施不同浓度ALA对黄瓜幼苗叶片叶绿素含量、抗氧化酶活性、脯氨酸和可溶性蛋白的含量、以及O2-?生成速率和MDA含量的影响，皆在探讨ALA在黄瓜应用上的浓度效应，以期为ALA在黄瓜生产上的推广应用提供技术支持。 1材料与方法 1.1材料培养 本试验以黄瓜品种津春4号为材料。挑选饱满的种子用50℃温水浸种灭菌10min，30℃恒温箱中催芽2d，种子露白时，播种于装有育苗专用基质（镇江兴农有机肥有限公司）的10cm×10cm（高度×口径）黑色营养钵中，放入步入式植物生长箱（GBC-1600K型培养箱，宁波江南仪器厂）内，培养条件设定温度为（25±1）℃/（18±1）℃（昼/夜），光周期为12h/12h（昼/夜），最大光照强度为10万lx，育苗期间每天上午8：00浇透水。 1.2材料处理 黄瓜幼苗培养至3叶1心期，选取生长一致的植株，用10、30、50、100mg/L的ALA（粉剂，购于Sigma公司）溶液喷施，并设清水（0mg/LALA）对照。喷施时溶液中添加0.01%Triton，均匀的喷洒叶片的正反面，以叶片滴水为喷施标准。每个处理重复3次，每个重复20棵植株。ALA处理后第4天，取第2片真叶测定相关指标。 1.3试验方法 ①叶片光合色素的含量测定采用参照Lichtenthaler[5]的方法，将黄瓜叶片剪碎放入小试管中，用95%乙醇提取液黑暗中静置提取24h，测定470、649、665nm的OD值，并计算叶绿素a（Chla）、叶绿素b（Chlb）、总叶绿素（Chl）和类胡萝卜素（Car）的含量以及Chla/b的比值。 ②抗氧化酶活性测定SOD活性测定按照Beauchamp等[6]的氮蓝四唑（NBT）光还原法进行，以引起50%光化还原抑制率的酶量为一个酶活性单位（U）。CAT活性测定参照Change等[7]的方法，以每1minOD240值减少0.01为1个酶活力单位（U）。APX活性测定参照Nakano等[8]方法。POD活性测定采用愈创木酚法，通过测定OD460的变化以测定POD的活力[7]。 ③脯氨酸含量测定脯氨酸含量测定参照张殿忠等[9]的磺基水杨酸提取法。 ④可溶性蛋白含量测定可溶性蛋白含量的测定按照bradford[10]的考马斯亮蓝G-250染色法，并以标准的BSA作对照。 ⑤O2-?生成速率、H2O2和MDA含量测定O2-?生成速率测定采用α-萘胺法[11]，H2O2含量的测定参照brennan和Frenkel方法进行[12]，MDA含量的测定用硫代巴比妥酸（TBA）法，以μmol?g-1（鲜样质量）表示[13]。 ⑥统计分析上述各项指标的测定，均重复3次。采用Excel201